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文檔簡介
1、為獲得環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶高產(chǎn)菌株，本論文從菌種的選育入手，研究了菌株的產(chǎn)酶特性，并用優(yōu)化策略優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，對環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行了純化，篩選適宜的純化體系，并研究酶的性質(zhì)，為工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用提供理論依據(jù)及參考。結(jié)果分述如下： 菌株分離篩選及鑒定從江西20份土壤樣品中分離篩選出115個產(chǎn)CGTase的菌株，以代號403的菌株產(chǎn)酶水平最高，作為后續(xù)誘變的出發(fā)菌株。采用紫外輻射和硫酸二乙酯復(fù)合誘變方法對菌株403進(jìn)行誘
2、變，得誘變株CLS403，其產(chǎn)酶能力為出發(fā)株的1.43倍。通過形態(tài)學(xué)、生理生化指標(biāo)及16SrRNA序列比對，該誘變菌株為地衣芽孢桿菌。 菌株產(chǎn)酶條件經(jīng)碳、氮源及添加劑篩選試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，最適合菌株CLS403產(chǎn)CGTase的發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L)：可溶性淀粉14.1g，硝酸銨8g，豆餅8g，KH2PO40.5g，MgSO47H2O0.1g，CaCl20.01g，pH6.5。最適產(chǎn)酶的培養(yǎng)條件為溫度35℃，250mL錐形裝30
3、mL培養(yǎng)基，于180r/min轉(zhuǎn)速下振蕩培養(yǎng)96h?！ ∶傅奶崛〖兓磧?yōu)化條件發(fā)酵生產(chǎn)的CGTase粗酶液，經(jīng)淀粉硫酸銨初步純化、DEAE-Cellulose離子交換和SephacrylS-200分子篩層析，CGTase粗酶液被提純63倍，比活力達(dá)88.2U/mg?！ ∶傅男再|(zhì)CLS403菌株的CGTase酶的最適反應(yīng)pH為6.5，最適反應(yīng)溫度為50℃；在pH6.0～8.0和45℃以下穩(wěn)定；以可溶性淀粉為底物的米氏常數(shù)Km值為3.0
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