“下病上治”——肌肉內(nèi)熱針刺激對(duì)弗氏佐劑大鼠肌肉痛的影響及機(jī)制研究.pdf

1、針灸在中國(guó)的應(yīng)用已經(jīng)有一千多年的歷史，針灸的主要適應(yīng)癥之一就是治療疼痛。早期研究證實(shí)，針灸對(duì)腰、腿痛及關(guān)節(jié)痛等疾病具有很好的鎮(zhèn)痛療效。盡管針灸療效確切，但以艾絨為主要燃燒材料的灸法存在煙霧大，易造成局部密閉空間內(nèi)空氣污染，及艾灰脫落易燙傷皮膚，溫度不易控制等難以克服的缺點(diǎn)。
　　內(nèi)熱針療法是近年來(lái)臨床使用的通過加熱電極來(lái)給予相應(yīng)熱刺激的治療措施，可被認(rèn)為是替代針灸療法的物理刺激方法，具有良好的鎮(zhèn)痛效果。課題組前期系列工作顯示:“不

2、引起明顯痛感”的溫?zé)岽碳?43℃)能單獨(dú)激活痛覺內(nèi)源性下行抑制作用，而不激活下行易化作用。同時(shí)，丘腦腹內(nèi)側(cè)（ventromedial，VM）核團(tuán)則參與了上述下行抑制作用的調(diào)控過程。
　　已知“下病上治”是中醫(yī)臨床常用的治療原則。盡管“下病上治”有著明顯的臨床鎮(zhèn)痛療效，然而涉及其鎮(zhèn)痛的神經(jīng)調(diào)控機(jī)理目前仍舊不甚清楚。本課題將在建立完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant，CFA)肌肉內(nèi)注射所誘導(dǎo)的肌肉痛模型基

3、礎(chǔ)上，通過下肢“承山穴(BL57)”和上肢“內(nèi)關(guān)穴(PC6)”分別給予不同時(shí)程和溫度的“穴位”內(nèi)熱針刺激，探索“下病上治”治法對(duì)肌肉痛的可能療效及區(qū)別，并進(jìn)一步探索脊髓以上高位中樞:丘腦相關(guān)核團(tuán)，參與上述鎮(zhèn)痛作用的神經(jīng)調(diào)控機(jī)制。
　　目的：
　　通過選用上肢內(nèi)關(guān)穴和下肢承山穴在43℃或46℃內(nèi)熱針對(duì)大鼠完全弗氏佐劑肌肉痛模型作用，比較內(nèi)關(guān)穴和承山穴對(duì)CFA肌肉痛模型的治療效果，進(jìn)一步確定“下病上治”是否具有臨床可行性。最后，

4、丘腦相關(guān)核團(tuán)給予不同受體拮抗劑探索“下病上治”中樞調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　1.傷害性機(jī)械性和熱刺激:大鼠造模前和治療前/后分別采用von frey機(jī)械刺激痛儀和熱刺痛儀，測(cè)定大鼠縮足反射閾值和潛伏期。
　　2.CFA建模:不同劑量CFA注射入大鼠一側(cè)后肢腓腸肌，建立肌肉痛模型。注射部位為腓腸肌正中部位，進(jìn)針深度大約0.5 cm，注射時(shí)間超過30 s。同時(shí)觀察受累組織炎性腫脹度情況。
　　3.內(nèi)熱針治療:在4％

5、 isoflurane吸入麻醉下，內(nèi)熱針（同心圓不銹鋼針:直徑1.05 mm，長(zhǎng)30 mm）刺入下肢“承山穴”/上肢“內(nèi)關(guān)穴”，深度0.5 cm，調(diào)節(jié)加熱溫度為43℃或46℃，給予不同時(shí)程的肌肉內(nèi)熱刺激，溫度變化不超過±0.25℃。
　　4.腦內(nèi)微量注射:在戊巴比妥鈉麻醉（50 mg/kg，腹腔注射）下，利用腦立體定位儀，進(jìn)行開顱手術(shù)放置套管(VM神經(jīng)核位于前囟后2.3-3.3 mm，中線旁開1.6 mm，顱骨下7-7.4 mm)

6、。大鼠傷口用無(wú)菌0.9％生理鹽水清洗，及抗生素治療，并用牙科水泥封閉。大鼠經(jīng)一周恢復(fù)，期間檢測(cè)大鼠運(yùn)動(dòng)功能，隨后核團(tuán)內(nèi)注射阿替美唑和WAY-100635，觀察大鼠在內(nèi)熱針治療后的大鼠熱反應(yīng)情況的變化。
　　5.大鼠肌肉受累組織的IL-1和TNF-α測(cè)量:采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行檢測(cè)
　　結(jié)果：
　　1.與生理鹽水對(duì)照組相比，一側(cè)腓腸肌內(nèi)注射100-200μl CFA均能引起大鼠雙側(cè)機(jī)械性痛敏反應(yīng)(P＜0.

7、05)。50-100μl CFA注射1天后，大鼠表現(xiàn)出雙側(cè)熱痛反應(yīng)降低現(xiàn)象;而200μl CFA注射后1h后即誘發(fā)大鼠雙側(cè)熱痛反應(yīng)降低現(xiàn)象，并維持7天(P＜0.05);一側(cè)腓腸肌內(nèi)注射100、200μl CFA均引起大鼠注射側(cè)后肢出現(xiàn)腳爪組織腫脹（P＜0.05），而對(duì)側(cè)后肢無(wú)顯著性變化(P＞0.05)。
　　2.15-45 min43℃內(nèi)熱針BL57穴位肌肉內(nèi)刺激對(duì)CFA致炎大鼠的雙側(cè)機(jī)械痛敏無(wú)明顯影響(P＞0.05);與15 m

8、in43℃內(nèi)熱針相比，30-45 min43℃內(nèi)熱針刺激能誘發(fā)更為明顯的雙側(cè)大鼠熱痛反應(yīng)降低現(xiàn)象(P＜0.05);30-45min43℃內(nèi)熱針穴位刺激明顯降低大鼠腳爪腫脹度(P＜0.05)。
　　3.30-45 min46℃內(nèi)熱針BL57穴位肌肉內(nèi)刺激誘發(fā)CFA致炎大鼠出現(xiàn)雙側(cè)機(jī)械痛敏顯著增高現(xiàn)象(P＜0.05)，雙側(cè)熱痛反應(yīng)降低現(xiàn)象更為明顯（P＜0.05）;15-45 min46℃內(nèi)熱針穴位刺激對(duì)致炎大鼠腳爪腫脹度沒有顯著影響(

9、P＞0.05)。
　　4.與同側(cè)后肢BL57穴位刺激效果類似，同側(cè)/對(duì)側(cè)上肢PC6穴位肌肉內(nèi)給予30min43℃內(nèi)熱針治療后，均對(duì)雙側(cè)后爪機(jī)械性痛敏現(xiàn)象沒有顯著影響(P＞0.05)，但能明顯增強(qiáng)雙側(cè)熱痛反應(yīng)降低程度(P＜0.05):并明顯降低同側(cè)后肢腳爪腫脹度(P＜0.05)。同側(cè)/對(duì)側(cè)上肢PC6穴位肌肉內(nèi)給予30 min46℃內(nèi)熱針治療后，能引起雙側(cè)機(jī)械性痛敏顯著增高(P＜0.05)，并明顯降低雙側(cè)熱痛反應(yīng)降低現(xiàn)象(P＜0.05

10、);然而，30 min46℃內(nèi)熱針同側(cè)/對(duì)側(cè)上肢PC6穴位肌肉內(nèi)治療后，同側(cè)CFA致炎大鼠后肢腳爪腫脹度沒有明顯改變(P＞0.05)。
　　5.丘腦VM核團(tuán)微量注射阿替美唑能顯著抑制43℃內(nèi)熱針?biāo)鸬臒嵬捶磻?yīng)降低現(xiàn)象(P＜0.05);而VM核團(tuán)內(nèi)微量注射阿替美唑和WAY-100635能抑制46℃內(nèi)熱針引起熱痛反應(yīng)降低現(xiàn)象(P＜0.05)。
　　6.43℃內(nèi)熱針BL57和PC6穴位刺激能顯著降低CFA大鼠肌肉痛模型受累組織中

11、IL-1及TNF-α含量(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.CFA肌肉內(nèi)注射誘發(fā)大鼠出現(xiàn)炎性肌肉痛，造成受累組織腫脹，組織IL-1和TNF-α含量增高，行為學(xué)表現(xiàn)為后足機(jī)械性痛敏增高，熱痛反應(yīng)降低現(xiàn)象。
　　2.43℃內(nèi)熱針能單獨(dú)激活內(nèi)源性下行抑制作用，顯著減輕CFA致炎大鼠腳爪腫脹度，降低受累組織內(nèi)IL-1和TNF-α含量。
　　3.46℃內(nèi)熱針能同時(shí)激活內(nèi)源性下行抑制作用及下行易化作用，但不能減輕CFA致