他汀藥對(duì)糖尿病大鼠肌肉的影響.pdf

1、目的：建立大鼠的糖尿病動(dòng)物模型，觀察模型組和他汀藥物組，大鼠神經(jīng)肌肉細(xì)胞形態(tài)改變以及肌纖維內(nèi)酶光密度、灰度值的變化，探討糖尿病肌病的發(fā)生機(jī)制及他汀類(lèi)藥物對(duì)糖尿病骨骼肌病變的影響。 方法：選擇體重200～240g的SD雄性大鼠四十只隨機(jī)分為4組，每組10只，分為對(duì)照用藥組(A組)、正常對(duì)照組(D組)、糖尿病模型組(C組)、模型用藥組(B組)用鏈尿佐菌素將B組和C組制成糖尿病模型后，A、B組大鼠用氟伐他汀灌胃，C、D組用等量自來(lái)水灌

2、胃。于六周、八周取大鼠的股四頭肌及腓腸神經(jīng)，神經(jīng)在解剖顯微鏡下分離出單根神經(jīng)纖維，光鏡下觀察髓鞘和軸索的變化，取1×1×1cm兩部分肌肉組織，一部分經(jīng)液氮迅速冷卻后，于冰凍切片機(jī)中連續(xù)切片行酶組織化學(xué)染色，以觀察肌纖維的形態(tài)、分型、酶的改變，并將所得圖像輸入細(xì)胞醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)分析病變面積的大小、灰度值和光密度值，一部分制成半薄切片用透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果：1大鼠于注射鏈尿佐菌素后取尾靜脈血監(jiān)測(cè)血糖的變化，72h后動(dòng)

3、物模型血糖值達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)，B組、C組大鼠8周內(nèi)血糖值一直維持在較高的水平，B組血糖值低于C組且P＜0.05兩者之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血膽固醇(TC)、血甘油三酯(TG)6周、8周末兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較C組＞B組＞D組，B、C組間比較P＜0.05存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組血膽固醇水平6周、8周末兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組血甘油三酯(TG)6周、8周末兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較P＞0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2肌纖維常規(guī)HE染色及酶組織化學(xué)染色

4、結(jié)果：HE染色中，糖尿病用藥組出現(xiàn)1例炎細(xì)胞浸潤(rùn)，糖尿病組及糖尿病用藥組大鼠血管壁出現(xiàn)不同程度的增厚，肌纖維不同程度的萎縮，萎縮的肌纖維以小圓形為主，也有部分的角型纖維，散在分布于肥大的肌纖維。糖尿病組中3例肌纖維內(nèi)出現(xiàn)空泡，糖尿病用藥組1例肌纖維內(nèi)出現(xiàn)微小空泡，這四例標(biāo)本蘇丹黑染色，糖原染色均呈陽(yáng)性，ATP酶染色顯示蘇丹黑染色陽(yáng)性纖維主要為Ⅰ型肌纖維，且以Ⅰ型纖維為主Gomoris染色3例糖尿病組，1例糖尿病用藥組肌纖維周邊出現(xiàn)異常的

5、紅色物質(zhì)。茜素紅染色2例糖尿病組及4例糖尿病用藥組有陽(yáng)性的肌纖維和血管，陽(yáng)性物質(zhì)彌散沉淀于血管的內(nèi)壁，還原型輔酶Ⅰ四唑氮還原酶(NADH-TR)染色，3例糖尿病組，2例糖尿病用藥組可觀察到邊緣有粗大不均的顆粒沉積。 3圖像結(jié)果：SBB染色陽(yáng)性區(qū)域的平均光密度值，平均灰度值C組(0.4604±0.0796，94.411±6.99)B組(0.3672±0.0684，113.16±15.660)與D組(0.2638±0.0148，14

6、0.11±4.40)比較，平均光密度值升高，平均灰度值降低，且P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C、B兩組間比較P＜0.05，有顯著差異；CA染色陽(yáng)性區(qū)域B組(0.2807±0.0225，133.01±6.80)與D組(0.2424±0.0123，144.76±3.94)比較P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C組(0.3544±0.0323，112.74±8.01)B組間比較，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；NADH染色陽(yáng)性區(qū)域的平均光密度值B組(0.264

7、1±0.0065，115.73±1.00)與D組(0.2472±0.0091，118.38±1.45)比較P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C(0.2935±0.0118，111.59±1.60)與B組間比較P＞0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅰ型、Ⅱ型肌纖維ATP酶光密度值比較C組Ⅰ型肌纖維0.383±0.126，Ⅱ型肌纖維0.236±0.053，B組Ⅰ型肌纖維0.413±0.025，Ⅱ型肌纖維0.247±0.026與D組Ⅰ型肌纖維0.577±0.02

8、1，Ⅱ型肌纖維0.378±0.044比較Ⅰ型肌纖維、Ⅱ型肌纖維光密度值均有顯著下降P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C、B兩組間比較P＞0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；大鼠Ⅰ型肌纖維、Ⅱ型肌纖維的橫截面積比較，Ⅰ型纖維的面積所占比例C組(33.29±4.96)％與B組(35.23±3.05)％，與D組(40.15±2.94)％比較P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C、B兩組組間比較P＞0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A組(45.35±3.27)％與D組比較P＜0.05有

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4鋨酸染色：僅1例糖尿病組的神經(jīng)有串珠樣改變提示神經(jīng)損傷。 5電鏡結(jié)果：肌纖維的電鏡觀察：在糖尿病組及糖尿病用藥組中線粒體大部分受損，嵴紊亂，外膜局部消失，并可見(jiàn)到大量再生的小型線粒體，血管內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞連接增寬，通透性大，吞飲小泡明顯增加，在微血管附近的肌膜下，肌細(xì)胞核常染色質(zhì)減少，異染色質(zhì)增多并呈塊狀邊集。肌纖維間的微血管管腔變窄，內(nèi)膜明顯突起形成管腔“封隔征”，基底膜明顯增厚，可見(jiàn)有糖原、脂肪顆粒沉積

10、于肌細(xì)胞膜上，肌絲完整，肌膜未見(jiàn)明顯異常。神經(jīng)的電鏡觀察：糖尿病組及糖尿病用藥組的肌間小神經(jīng)內(nèi)部線粒體嵴紊亂、消失、濃縮，膜結(jié)構(gòu)模糊，微絲微管結(jié)構(gòu)紊亂，雪旺氏細(xì)胞內(nèi)部線粒體結(jié)構(gòu)模糊，細(xì)胞核內(nèi)，常染色質(zhì)減少，異染色質(zhì)增多。 結(jié)論：1糖尿病大鼠僅有極少數(shù)的神經(jīng)呈脫髓鞘改變；2糖尿病組肌細(xì)胞出現(xiàn)酶的代謝異常，線粒體、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷嚴(yán)重，脂肪、糖原增多；3糖尿病肌病的發(fā)病機(jī)制與微血管的病變、代謝的紊亂等因素有關(guān)；4他汀類(lèi)藥物可以通過(guò)改