復(fù)方血竭制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌的療效及機(jī)制初探.pdf

1、隨著潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)的發(fā)病率逐年上升，潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌(ulcerative colitis related colorectal cancer,UCRCC)也愈加受到人們關(guān)注。研究表明，Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常激活在UCRCC發(fā)生及進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。由于傳統(tǒng)結(jié)腸癌化療藥物常引起嚴(yán)重副作用，患者生存時(shí)間和預(yù)后并沒(méi)有得到明顯改善，所以，尋找更加安全有效的預(yù)防和治療結(jié)腸

2、癌的藥物已經(jīng)成為目前亟需解決的問(wèn)題。天然藥物由于具有較高的生物活性和安全性，為腫瘤的治療提供了一個(gè)新的視點(diǎn)。
　　通過(guò)前期研究，我們發(fā)現(xiàn)復(fù)方血竭制劑在UC的治療中具有良好效果，為了進(jìn)一步觀察該中藥制劑對(duì)UCRCC的療效，我們建立了小鼠實(shí)驗(yàn)性UCRCC模型，并觀察不同劑量復(fù)方血竭制劑對(duì)UCRCC小鼠Wnt/β-catenin信號(hào)通路中β-catenin蛋白的分布以及靶基因C-myc、PCNA表達(dá)量的影響，探討其可能的抗腫瘤機(jī)制。

3、r>　　實(shí)驗(yàn)中，我們將60只5周齡BALB/c小鼠按照隨機(jī)原則分為正常對(duì)照組、UCRCC模型組、低劑量復(fù)方血竭制劑治療組和高劑量復(fù)方血竭制劑治療組，每組15只，先適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。正常對(duì)照組小鼠持續(xù)用無(wú)菌蒸餾水喂養(yǎng)，自實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至實(shí)驗(yàn)結(jié)束;模型組及兩治療組小鼠均采用氧化偶氮甲烷(azoxymethane，AOM)/葡聚糖硫酸鈉(dextran sodium sulphate，DSS)方法造模，低、高劑量治療組每天分別予以13ml/kg和26

4、ml/kg等效劑量復(fù)方血竭制劑灌胃，自AOM腹腔注射當(dāng)天開(kāi)始至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。在喂養(yǎng)小鼠過(guò)程中進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)(disease activity index，DAI)評(píng)分，造模10周后脫頸椎處死所有小鼠，取出回盲部至肛門(mén)全部結(jié)直腸組織，行大體形態(tài)及組織學(xué)形態(tài)觀察，通過(guò)免疫組化（immunohistochemistry，IHC）、western-blot、qRT-PCR方法檢測(cè)各組小鼠結(jié)直腸組織β-catenin蛋白分布以及C-myc、PCNA

5、基因轉(zhuǎn)錄、總蛋白表達(dá)，觀察不同劑量復(fù)方血竭制劑對(duì)上述指標(biāo)的影響。
　　結(jié)果顯示正常對(duì)照組小鼠肉眼及鏡下均未見(jiàn)明顯異常。模型組大體觀察可見(jiàn)廣泛糜爛、潰瘍，均可見(jiàn)息肉狀隆起形成，以末端結(jié)腸為主;組織學(xué)觀察可見(jiàn)廣泛炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及不同程度上皮內(nèi)瘤變，散在癌變表現(xiàn)。治療組肉眼可見(jiàn)黏膜充血、水腫，伴散在糜爛形成，偶見(jiàn)息肉狀隆起;鏡下可見(jiàn)糜爛、壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，散在不同程度上皮內(nèi)瘤變，少數(shù)組織內(nèi)存在癌變。在第1、2、3個(gè)循環(huán)周期末，與正常組比

6、較，模型組及治療組DAI評(píng)分增高明顯(P＜0.05）;治療組DAI評(píng)分均低于模型組(P＜0.05），高、低治療組之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。免疫組化結(jié)果顯示:β-catenin蛋白在正常組呈細(xì)胞膜表達(dá)陽(yáng)性;模型組多數(shù)細(xì)胞呈細(xì)胞核陽(yáng)性表達(dá)和/或胞漿異位表達(dá)，小鼠免疫組化陽(yáng)性率為92.3％，顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05）;高、低劑量治療組細(xì)胞核陽(yáng)性明顯減少，多呈細(xì)胞膜/胞漿表達(dá)陽(yáng)性，得分結(jié)果以弱陽(yáng)性及陽(yáng)性為主，總體陽(yáng)性率分別為

7、66.7％和80.0％，均顯著低于模型組(P＜0.05），但明顯高于對(duì)照組(P＜0.05）。Western-blot結(jié)果顯示:模型組及高、低劑量治療組中β-catenin蛋白入核量(分別為1.826±0.192，1.049±0.108，1.063±0.144)較正常對(duì)照組(0.127±0.011)明顯增加(P＜0.05），C-myc（0.933±0.105，0.620±0.079，0.615±0.083）和PCNA（0.238±0.02

8、6，0.132±0.016，0.136±0.021）蛋白表達(dá)量較各自正常對(duì)照組（0.141±0.022，0.065±0.008）也顯著升高(P＜0.05）;與模型組比較，治療組中β-catenin入核明顯減少、C-myc和PCNA蛋白表達(dá)量均顯著降低(P＜0.05)，兩治療組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05）。QRT-PCR結(jié)果顯示:各組β-catenin基因mRNA表達(dá)量(分別為0.098±0.087，1.071±0.110，1.025±

9、0.082，1.063±0.104)無(wú)顯著差異(P＞0.05），模型組及高、低劑量治療組C-myc基因（6.312±0.335，2.735±0.143，2.820±0.179）和PCNA（4.928±0.296，2.453±0.163，2.336±0.171）mRNA表達(dá)量較各自正常對(duì)照組（0.641±0.122，0.565±0.108）顯著升高(P＜0.05）;與模型組比較，治療組中C-myc和PCNA基因mRNA表達(dá)量均顯著降低(P