長(zhǎng)鏈非編碼RNA母系表達(dá)基因3在小兒先天性巨結(jié)腸中的作用及意義.pdf

1、目的：
　　檢測(cè)長(zhǎng)鏈非編碼RNA母系表達(dá)基因3（maternally expressed gene3 MEG3）在小兒先天性巨結(jié)腸（Hirschsprung’s disease HD）病變腸管中的表達(dá)情況，并通過(guò)觀(guān)察過(guò)表達(dá)MEG3對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株（SK-N-BE(2)）增殖、克隆、侵襲及凋亡的影響，探討MEG3在HD中的作用及作用機(jī)制。
　　方法：
　　用RT-qPCR方法檢測(cè)17例HD患兒病變結(jié)腸組織和17例非

2、HD也無(wú)腸道畸形嬰兒正常結(jié)腸組織中MEG3的表達(dá)量，用PASS檢測(cè)其效能，并用ROC曲線(xiàn)下面積（AUC）及95％可行區(qū)間表示MEG3在HD中的診斷效能，評(píng)價(jià)MEG3在HD中的診斷價(jià)值。應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染技術(shù)，在SK-N-BE(2)細(xì)胞中轉(zhuǎn)染MEG3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，設(shè)立MEG3高表達(dá)組、空載體組及對(duì)照組，并應(yīng)用CCK-8、Edu細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、平板克隆技術(shù)、TRANSWELL技術(shù)、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)過(guò)表達(dá)MEG3對(duì)SK-N-BE(2)細(xì)胞的增

3、殖能力、克隆能力、侵襲能力及凋亡情況的影響。
　　結(jié)果：
　　RT-qPCR結(jié)果顯示：HD患兒病變結(jié)腸組織中MEG3表達(dá)量較正常結(jié)腸組織中MEG3表達(dá)量明顯升高（P<0.01），效能檢測(cè)顯示效能達(dá)標(biāo)，實(shí)現(xiàn)100%的檢測(cè)功率，ROC曲線(xiàn)顯示：曲線(xiàn)下面積（AUC）為84.9%，（95%可行區(qū)間71.6%-98.3%），最佳陽(yáng)性截?cái)嘀?cut off value)為1.46，靈敏度為82.4%，特異度為82.4%。MEG3過(guò)表達(dá)質(zhì)

4、粒轉(zhuǎn)染SK-N-BE(2)細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率為35.4%，達(dá)到轉(zhuǎn)染要求，MEG3過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的增殖能力、克隆能力以及侵襲能力與空載體組及對(duì)照組比較明顯降低（P<0.01），流式細(xì)胞檢測(cè)顯示：MEG3高表達(dá)組與空載體組及對(duì)照組比較細(xì)胞凋亡明顯增加（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　HD患兒病變結(jié)腸組織中MEG3表達(dá)量明顯升高，MEG3可能通過(guò)調(diào)控SK-N-BE(2)細(xì)胞的增殖、克隆、侵襲與凋亡參與HD的發(fā)病，在HD的早期診斷與治療