鯉魚脾臟組織細(xì)胞膜IgM結(jié)合蛋白（IGBP）的分離純化及部分性質(zhì)研究.pdf

1、本研究以我國常見的鯉魚(Cyprinus carpio L．)為材料，對鯉魚脾臟組織細(xì)胞膜表面存在的免疫球蛋白結(jié)合蛋白(IGBP)進(jìn)行了分離，并對其在鯉魚其它組織中的分布進(jìn)了研究。 1.采用Hitrap protein A HP親和層析法從鯉魚血清中純化得到IgM，SDS-PAGE分析表明，血清IgM可以解離形成重鏈和輕鏈，分子量分別為82kDa和29kDa。 2.以鯉IgM制備親和層析柱，制備收集鯉魚脾臟細(xì)胞膜蛋白并經(jīng)

2、IgM制備的親和層析柱，分離純化獲得鯉魚IgM結(jié)合蛋白(IGBP)，SDS-PAGE分析表明，在38 kDa到45 kDa范圍內(nèi)共有三種IgM結(jié)合蛋白。用IgM結(jié)合蛋白作為抗原免疫豚鼠制備豚鼠抗IGBP的抗血清。 3.利用不同的熒光標(biāo)記物對鯉魚脾臟、腸、皮膚及肝組織細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記，并進(jìn)行激光共聚焦觀察分析。首先，利用FITC標(biāo)記鯉魚血清IgM(簡稱FITC-IgM)，進(jìn)行免疫組織化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，鯉魚脾臟、腸、皮膚及肝組織細(xì)胞

3、呈現(xiàn)IgM結(jié)合陽性。進(jìn)一步利用親和層析分離得到的IGBP免疫豚鼠制備抗IGBP抗血清(Anti-IGBP)作為一抗，以FITC標(biāo)記的羊抗豚鼠抗體為二抗進(jìn)行間接免疫熒光染色。觀察顯示，鯉魚脾臟、腸、皮膚及肝組織細(xì)胞呈現(xiàn)IGBP陽性，而以正常豚鼠血清作為一抗的對照組則顯示IGBP陰性。以上研究結(jié)果表明，IgM結(jié)合蛋白(IGBP)不僅存在于脾臟組織細(xì)胞中，同時(shí)鯉魚腸、皮膚及肝組織的細(xì)胞也有IgM結(jié)合蛋白(IGBP)的存在。 本研究通過