綠色熒光蛋白轉基因小鼠的建立及可視化胚胎工程的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩51頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、綠色熒光蛋白(GFP)是海洋生物水母(aequorea,victoria)體內分離純化出來的一種能發(fā)射強烈熒光的特殊蛋白質,在無任何協(xié)同因子、底物或附加基因產物存在的情況下就能產生穩(wěn)定的熒光,而且這種熒光很容易通過熒光顯微鏡或者肉眼即可觀察到。因此,GFP是一種全新的、應用廣泛的遺傳標記(genetic marker)和蛋白質標記物(protein tag)。 綠色熒光蛋白可以提高轉基因動物的制備效率,即將待轉的目的基因構件與

2、GFP基因串聯(lián)起來一并整合,由于GFP基因的表達產物在胚胎發(fā)育的早期即可檢測到,我們可以只選擇那些只表達了GFP陽性重組體的胚胎進行移植,這樣即減少移植胚胎的盲目性,又提高轉基因動物的制作效率。 用顯微注射法將GFP基因注入FVB/NJ小鼠受精卵原核內,獲得的子代鼠3周后,提取鼠尾基因組DNA,應用PCR技術進行檢測,獲得5只PCR陽性小鼠;通過整體成像儀觀察其中3只(F0)有綠色熒光表達。對F0代轉基因小鼠進行傳代,獲得子代

3、小鼠通過整體成像儀觀察7只(F1)有綠色熒光表達,繼而在F1代GFP轉基因小鼠中進行交配,得到子代鼠,經(jīng)整體成像儀觀察,發(fā)現(xiàn)35只(F2)小鼠有綠色熒光表達,表明初步建立了全身有熒光表達并能傳代的GFP轉基因小鼠。這為我們進行可視化胚胎工程研究奠定了基礎。 GFP轉基因小鼠可視化胚胎工程的實驗研究: (1)采集GFP轉基因雄鼠附睪尾部精子與常規(guī)超排法得到KM鼠的卵母細胞在培養(yǎng)液中進行體外受精,建立體外受精模型,并將受

4、精卵移入培養(yǎng)液中進行體外培養(yǎng)。通過熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),體外受精后6h受精卵有綠色熒光表達. (2)將體外受精后的胚胎體外培養(yǎng)至囊胚,觀察該胚胎卵裂球發(fā)育分化的情況。有的胚胎發(fā)生阻滯而未能繼續(xù)發(fā)育;有的發(fā)育至4-8細胞期;有的胚胎可發(fā)育至桑椹胚和囊胚階段,整個胚胎呈現(xiàn)綠色熒光。雖然胚胎質量的優(yōu)劣是影響體外培養(yǎng)是否成功的重要因素,而對其起決定作用的是胚胎體外培養(yǎng)條件,其中包括培養(yǎng)液的成分和培養(yǎng)體系。 (3)GFP轉基因小

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論