TLRs、MAPK信號(hào)通路在青藤堿誘導(dǎo)大鼠imDC的作用初步研究.pdf

1、背景：樹(shù)突狀細(xì)胞在移植排斥反應(yīng)過(guò)程中起著至關(guān)鍵性的作用,利用未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(immature dendritic cell，imDC)誘導(dǎo)供體特異性免疫耐受有可能成為防治器官移植排斥反應(yīng)的重要途徑。Toll樣受體（toll like receptor，TLR）、絲裂原激活蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK)在樹(shù)突狀細(xì)胞成熟過(guò)程中扮演著非常重要的角色。大量研究發(fā)現(xiàn)青藤堿具有免疫抑制作用，

2、本研究旨在前期研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步明確青藤堿誘導(dǎo)imDC相關(guān)機(jī)制，為其在腎移植臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的：通過(guò)檢測(cè)經(jīng)青藤堿誘導(dǎo)的大鼠來(lái)源DCs中TLRs、磷酸化ERK1/2、p38MAPK及 JNK的表達(dá)水平，探討青藤堿對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞分化、成熟及功能的影響，并初步研究青藤堿發(fā)揮免疫抑制作用的可能機(jī)制，為其在器官移植免疫耐受方面的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：體外培養(yǎng)wisatr大鼠骨髓來(lái)源前體細(xì)胞，顯微鏡下觀察青藤堿處

3、理DCs與常規(guī)誘導(dǎo)DCs的形態(tài)學(xué)差異，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DCs的CD表型特點(diǎn)。以脂多糖刺激誘導(dǎo) DCs成熟，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)青藤堿對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的樹(shù)突狀細(xì)胞表面 TLR2、TLR3、TLR4表達(dá)的影響；利用蛋白印跡雜交（Western blot）法檢測(cè)青藤堿處理對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的 DCs中 ERK1/2、p38MAPK、JNK等蛋白磷酸化和非磷酸化的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、顯微鏡下觀察青藤堿處理DCs細(xì)胞形態(tài)無(wú)成熟樹(shù)突狀細(xì)胞特征，且DC

4、s表型CD80、CD86處于低表達(dá)狀態(tài)。2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)青藤堿+脂多糖組 DCs表面 TLRs相對(duì)表達(dá)量 TLR2（84.6±0.34％）、TLR3（83.3±0.14%）、TLR4（83.8±0.16%），較單純脂多糖組 DCs表面 TLRs相對(duì)表達(dá)量 TLR2（94.35±0.16%）、TLR3（97.55±0.16%）、TLR4（94.6±0.12%）明顯降低。Western blot結(jié)果顯示青藤堿+脂多糖組DCs內(nèi)磷酸化的ER