沉默COX-2對(duì)非酒精性脂肪肝細(xì)胞凋亡及神經(jīng)酰胺水平的影響.pdf

1、背景與目的：神經(jīng)酰胺（Ceramide，Cer）作為細(xì)胞內(nèi)第二信使分子，廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、生長(zhǎng)抑制和凋亡等多種細(xì)胞活動(dòng)，是重要的促凋亡因子，參與非酒精性脂肪病(Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)的發(fā)生發(fā)展。環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）是前列腺素合成限速酶，由各種刺激因子誘導(dǎo)產(chǎn)生，參與炎癥、纖維化和腫瘤等病理過程，可促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡，加重肝纖維化。因此，本研

2、究從神經(jīng)酰胺這一新視角探討COX-2促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡參與NAFLD形成的機(jī)制，為研究NAFLD機(jī)制及防治提供新思路和尋找新的藥物治療靶點(diǎn)。
　　方法：48只雄性SD大鼠適應(yīng)性培養(yǎng)1周后，完全隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組、NAFLD模型組、空質(zhì)粒組、COX-2shRNA組，每組12只。除對(duì)照組外，飼喂高脂飼料進(jìn)行造模，空質(zhì)粒組和COX-2shRNA組大鼠于造模第一周開始，分別尾靜脈注射空質(zhì)粒載體和腺病毒（PBS稀釋），劑量為1×109pf

3、u/只，每周1次，共12周。蘇木精-伊紅染色法(Hematoxylin-eosin staining，HE stain)檢測(cè)大鼠肝臟脂肪變性、纖維化程度和炎癥活動(dòng)度；油紅O染色檢測(cè)肝細(xì)胞脂肪變性程度；Masson染色檢測(cè)大鼠肝臟膠原面積;實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real Time-PCR，RT-PCR）檢測(cè)肝組織中COX-2及α-SMAmRNA表達(dá)水平；TUNEL染色檢測(cè)大鼠肝細(xì)胞凋亡程度；高效液相色譜法(High performance

4、liquid chromatography，HPLC)檢測(cè)肝臟神經(jīng)酰胺水平。
　　結(jié)果：
　　1.COX-2shRNA改善NAFLD大鼠肝臟脂肪變性、膠原沉積、炎性浸潤(rùn)及纖維化程度。
　　2.COX-2shRNA組大鼠肝臟組織中COX-2mRNA表達(dá)水平低于NAFLD模型組及空質(zhì)粒組(P＜0.001)。
　　3.COX-2shRNA組大鼠肝臟組織中α-SMAmRNA表達(dá)水平低于NAFLD模型組及空質(zhì)粒組(P＜0.

5、001)。
　　4.正常組、NAFLD模型、空質(zhì)粒組及COX-2 shRNA組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為（1.80±0.94）％、（6.47±2.53）%、（4.93±1.87）%、（3.93±1.67）%。COX-2shRNA組凋亡指數(shù)低于NAFLD模型組及空質(zhì)粒組(P＜0.001)。
　　5.COX-2 shRNA組大鼠肝組織神經(jīng)酰胺水平低于NAFLD模型組及空質(zhì)粒組（P＜0.001）。
　　結(jié)論：
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