肌球蛋白X在側(cè)腦室前下區(qū)成神經(jīng)細(xì)胞遷移中作用的研究.pdf

1、側(cè)腦室前下區(qū)（anteriorsubventrieularzone，SVZa）是大腦中神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)量較多的區(qū)域之一，該區(qū)域神經(jīng)干細(xì)胞產(chǎn)生的成神經(jīng)細(xì)胞是最具特色的細(xì)胞群，它們自產(chǎn)生起即具備發(fā)育成神經(jīng)細(xì)胞的潛能，但在遷移至嗅球的過程中始終保持向神經(jīng)細(xì)胞分化的潛能而不進(jìn)一步分化，直到遷移至目的地后才分化為成熟的神經(jīng)細(xì)胞，因此，SVZa成神經(jīng)細(xì)胞是研究神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育及遷移的較佳模型。肌球蛋白X（MyosinX）是脊椎動(dòng)物所特有的細(xì)胞骨架蛋白，在腦

2、、腎、肝等大多數(shù)組織中都有表達(dá)，它的顯著特點(diǎn)是定位于細(xì)胞絲足的頂端和片狀偽足的邊緣，MyosinX作為一個(gè)動(dòng)力蛋白分子，起到連接細(xì)胞膜蛋白與細(xì)胞內(nèi)骨架蛋白的橋梁作用，推測它可能在SVZa成神經(jīng)細(xì)胞的遷移過程中起到重要作用。 通過對新生大鼠腦切片進(jìn)行免疫組化，觀察SVZa及其成神經(jīng)細(xì)胞遷移至嗅球的喙?fàn)钸w移流區(qū)域（rostralmigratorystream，RMS）MyosinX的表達(dá)與分布，在獲得MyosinX在RMS區(qū)域高表達(dá)

3、的基礎(chǔ)上，建立新生大鼠嗅球RMS區(qū)域外植體培養(yǎng)體系，通過Matrigel和Collagen不同比例的膠原混合物，優(yōu)化外植體培養(yǎng)條件。進(jìn)一步，分離RMS區(qū)域的成神經(jīng)細(xì)胞，利用構(gòu)建的GFP融合表達(dá)載體MyosinX—siRNA和scramblesiRVA轉(zhuǎn)染分離后的成神經(jīng)細(xì)胞，懸滴法培養(yǎng)成團(tuán)，模擬體外外植體包埋培養(yǎng)，24小時(shí)后，表達(dá)scramblesiRNA的成神經(jīng)細(xì)胞大量從細(xì)胞團(tuán)中遷移出來，而表達(dá)MyosinX—siRNA的成神經(jīng)細(xì)胞遷移