囊胚細胞為媒體轉(zhuǎn)基因雞的技術(shù)研究.pdf

1、本文對囊胚細胞為媒體轉(zhuǎn)基因雞的技術(shù)進行研究，取得研究成果如下： 1.雞囊胚細胞體外培養(yǎng)時，添加10％的胎牛血清，細胞的貼壁率最高；M199、EMDM兩種細胞培養(yǎng)液對細胞貼壁率的影響差異不顯著；培養(yǎng)時間為24h時細胞的貼壁率最高；細胞貼壁率最高達60％左右。 2.雞囊胚細胞體外轉(zhuǎn)染時，貼壁細胞與懸浮細胞轉(zhuǎn)染都可獲得60％左右細胞的瞬時表達；脂質(zhì)體量為4μg，質(zhì)粒DNA量為3μg時，轉(zhuǎn)染自來航雞原代囊胚細胞的效率最高。

2、 3.對受體種蛋進行顯微注射時，種蛋赤道面開窗的孵化率最高，達26.74％；對開窗種蛋采用四種不同材料封口，其中用蛋殼膜加封口膠進行封口的種蛋孵化率最好，達27.08％；未開窗處理的種蛋與開窗處理的種蛋的孵化率有顯著差異(p＜0.05)；開窗處理的種蛋由于破壞了原來的結(jié)構(gòu)，導致孵化率顯著降低。其中注射囊胚細胞的種蛋孵化率為28.43％。 4.對轉(zhuǎn)基因雞的胚胎及一周齡的小雞進行熒光檢測和PCR檢測時，觀察到弱的綠色熒光，PCR檢