囊胚細(xì)胞為媒體轉(zhuǎn)基因雞的技術(shù)研究.pdf

1、本文對(duì)囊胚細(xì)胞為媒體轉(zhuǎn)基因雞的技術(shù)進(jìn)行研究，取得研究成果如下： 1.雞囊胚細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)，添加10％的胎牛血清，細(xì)胞的貼壁率最高；M199、EMDM兩種細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)細(xì)胞貼壁率的影響差異不顯著；培養(yǎng)時(shí)間為24h時(shí)細(xì)胞的貼壁率最高；細(xì)胞貼壁率最高達(dá)60％左右。 2.雞囊胚細(xì)胞體外轉(zhuǎn)染時(shí)，貼壁細(xì)胞與懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染都可獲得60％左右細(xì)胞的瞬時(shí)表達(dá)；脂質(zhì)體量為4μg，質(zhì)粒DNA量為3μg時(shí)，轉(zhuǎn)染自來(lái)航雞原代囊胚細(xì)胞的效率最高。

2、 3.對(duì)受體種蛋進(jìn)行顯微注射時(shí)，種蛋赤道面開(kāi)窗的孵化率最高，達(dá)26.74％；對(duì)開(kāi)窗種蛋采用四種不同材料封口，其中用蛋殼膜加封口膠進(jìn)行封口的種蛋孵化率最好，達(dá)27.08％；未開(kāi)窗處理的種蛋與開(kāi)窗處理的種蛋的孵化率有顯著差異(p＜0.05)；開(kāi)窗處理的種蛋由于破壞了原來(lái)的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致孵化率顯著降低。其中注射囊胚細(xì)胞的種蛋孵化率為28.43％。 4.對(duì)轉(zhuǎn)基因雞的胚胎及一周齡的小雞進(jìn)行熒光檢測(cè)和PCR檢測(cè)時(shí)，觀察到弱的綠色熒光，PCR檢