小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞中AC基因亞型的表達及AC3對其纖毛長度的影響.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs),也稱骨髓基質(zhì)來源干細胞，是存在于骨髓中的一類具有多向分化潛能的干細胞，可分化為成骨細胞、骨骼肌細胞及脂肪細胞等，參與體內(nèi)骨平衡調(diào)節(jié)和骨造血微環(huán)境構(gòu)成。腺苷酸環(huán)化酶（ Adenylyl cyclase，AC）作為第二信使cAMP信號通路的重要組分，在BMSCs的成骨/成脂分化中具有重要作用，但BMSCs中AC亞型表達種類，尚待明了。初級纖毛（Primary

2、 cilia）是一種突出于真核細胞表面的“毛發(fā)狀”細胞器，是原生生物到脊椎動物中一種在進化上高度保守且必不可少的細胞器，具有感測和轉(zhuǎn)導(dǎo)機械力和化學(xué)信號并產(chǎn)生信號級聯(lián)反應(yīng)等功能，對BMSCs細胞增殖與分化具有關(guān)鍵作用。AC3不僅在哺乳動物主要嗅覺表皮組織神經(jīng)細胞的初級纖毛介導(dǎo)的嗅覺信號傳導(dǎo)過程中具有重要調(diào)節(jié)作用，還與BMSCs中的初級纖毛共表達。但AC3是否影響B(tài)MSCs中細胞纖毛長度進而影響B(tài)MSCs的增殖與分化，尚未明確。
　　

3、本研究通過對小鼠BMSCs原代培養(yǎng)條件優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)小鼠BMSCs原代培養(yǎng)在以4.0×106cell/mL的骨髓單核細胞濃度培養(yǎng)，并于4d首次換液，增殖速度快，生長狀態(tài)良好。對最適培養(yǎng)條件下生長良好的的細胞，提取其總RNA并反轉(zhuǎn)錄；采用RT-PCR和序列比對分析，確定了在原代小鼠BMSCs中有6種AC亞型表達，分別為AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9；分別對野生型小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（WT-BMSCs）和AC3基因敲除型小鼠骨髓

4、間充質(zhì)干細胞（MUT-BMSCs）進行體外培養(yǎng)、饑餓誘導(dǎo)和LiCl刺激，利用細胞免疫熒光染色對初級纖毛進行亞定位及長度統(tǒng)計分析。相同體外培養(yǎng)條件下，相較于WT-BMSCs細胞，MUT-BMSCs細胞增殖速度相對較慢；同時，體外誘導(dǎo)條件下，WT-BMSCs細胞初級纖毛長度最長為8.96μm，MUT-BMSCs細胞初級纖毛長度最長為5.61μm，MUT-BMSCs細胞初級纖毛長度明顯短于WT-BMSCs細胞初級纖毛長度。本研究明確了原代小鼠