免疫檢測點阻斷劑聯(lián)合石蒜堿治療腎癌的作用及機(jī)制研究.pdf

1、近年來，關(guān)于腎癌的處理經(jīng)歷很大變化，如對于局部腎癌，腎部分切除術(shù)即可達(dá)到滿意的臨床結(jié)果，而對于轉(zhuǎn)移性腎癌，則以血管內(nèi)皮生長因子或雷帕霉素信號通路的靶向治療占主導(dǎo)。另外，以免疫檢測點為靶點的腫瘤免疫治療，正受到高度關(guān)注，細(xì)胞毒性T細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)阻斷劑作為此類療法的代表，其臨床研究結(jié)果顯示出較強(qiáng)的抗腫瘤能力。
　　石蒜堿(Lycorine)屬異喹啉類生物堿，提取自石蒜科植物，現(xiàn)有的研究證實其具有多種生物藥理活性，因近年

2、來許多研究表明其具有抗腫瘤作用，關(guān)于石蒜堿的抗腫瘤能力日益受到重視，其抗腫瘤機(jī)制包括:誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期阻滯，誘導(dǎo)程序性壞死及抑制血管生成擬態(tài)等。然而，尚無關(guān)于免疫檢查點阻斷劑聯(lián)合石蒜堿對腎臟惡性腫瘤作用效應(yīng)的研究。
　　因此，在本研究中采用熒光素酶報告基因技術(shù)標(biāo)記及構(gòu)建小鼠腎癌細(xì)胞:Renca-Luc，并以此細(xì)胞株建立免疫功能正常的小鼠原位腎細(xì)胞癌及肺轉(zhuǎn)移模型，通過IVIS2000動物活體熒光成像系統(tǒng)實現(xiàn)無創(chuàng)、動態(tài)監(jiān)測活體水

3、平下腫瘤的生長情況，從而了解免疫檢查點阻斷劑及石蒜堿對腎臟惡性腫瘤的作用效應(yīng)，并探討石蒜堿是否可提高CTLA-4阻斷劑的治療效應(yīng)，降低其不良事件的發(fā)生率。
　　通過體外實驗，明確鹽酸石蒜堿可有效抑制多種人源腎癌細(xì)胞株及鼠源腎癌細(xì)胞Renca的增殖能力，而且Renca最為敏感;同時可抑制Renca的遷移及侵襲能力。為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，檢測經(jīng)鹽酸石蒜堿作用后Renca各細(xì)胞周期的分布情況，結(jié)果顯示sub-G1期細(xì)胞含量明顯增高，伴

4、隨G2/M期細(xì)胞含量降低，且呈濃度相關(guān)。免疫印跡技術(shù)檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)情況后，得出鹽酸石蒜堿可抑制Renca的細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclin D1，cyclin D3及CDK2等表達(dá)。隨后通過穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的小鼠腎癌細(xì)胞(Renca-luc)構(gòu)建小鼠原位腎及肺轉(zhuǎn)移模型確認(rèn)，聯(lián)合應(yīng)用鹽酸石蒜堿及免疫檢測點阻斷劑可產(chǎn)生增強(qiáng)的抗腫瘤效應(yīng)。除此之外，在本研究中，首次報道聯(lián)合應(yīng)用鹽酸石蒜堿及免疫檢測點阻斷劑可以通過下調(diào)T調(diào)節(jié)細(xì)胞伴隨效應(yīng)T