結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移術(shù)前評(píng)估--microRNA標(biāo)志物和臨床病理評(píng)估.pdf

1、背景：有近15-25％結(jié)直腸癌病人表現(xiàn)為同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移，另有近50％病人在結(jié)直腸癌原發(fā)灶切除后2年出現(xiàn)異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移。近年來(lái)，綜合治療（手術(shù)為主）使結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人生存得到了顯著提高，根治切除術(shù)后5年生存率可達(dá)50％左右。雖然已有學(xué)者提出用于預(yù)測(cè)可切除結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移預(yù)后的模型，但仍缺乏精準(zhǔn)的術(shù)前評(píng)估，致使約40％的術(shù)前認(rèn)為可切除的病人，因術(shù)前估計(jì)不足，施行不必要的“剖腹探查”。如何更好的術(shù)前評(píng)估結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移病人引起了廣泛重視。結(jié)直腸癌肝

2、轉(zhuǎn)移的發(fā)生除了與癌基因，抑癌基因異常表達(dá)或丟失有關(guān)，尚與“表觀遺傳學(xué)”（甲基化，乙?；蔷幋aRNA調(diào)控）密切相關(guān)。已有綜述表明，在腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生過(guò)程中廣泛涉及microRNA的調(diào)控。亦已發(fā)現(xiàn)相當(dāng)數(shù)量的microRNA與此相關(guān)，已有學(xué)者稱(chēng)此類(lèi)microRNA為“metastamiR”。
　　目的：通過(guò)microRNA芯片高通量的分析與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移可能相關(guān)的microRNA標(biāo)志物，并通過(guò)定量PCR(qRT-PCR)驗(yàn)證。對(duì)芯片發(fā)現(xiàn)

3、與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的microRNA494進(jìn)行深入研究，明確microRNA494促進(jìn)肝轉(zhuǎn)移發(fā)生的機(jī)制。采用meta分析明確PET-CT的應(yīng)用能否在傳統(tǒng)的影像學(xué)檢查的基礎(chǔ)上為結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移病人術(shù)前評(píng)估提供更多的價(jià)值。采用SEER數(shù)據(jù)分析淋巴結(jié)狀態(tài)對(duì)可切除轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌預(yù)后的影響。
　　方法：⑴獲取31對(duì)結(jié)直腸癌“肝轉(zhuǎn)移”與“無(wú)肝轉(zhuǎn)移”的原發(fā)灶新鮮組織，提取totalRNA。采用Agilent芯片分析兩組間microRNA表達(dá)和基因

4、表達(dá)的差異。分析與結(jié)直腸肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的microRNA譜及其調(diào)控的靶基因。⑵選取126個(gè)結(jié)直腸癌病人，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果，采用石蠟標(biāo)本對(duì)miR15b，miR19a，miR20a，miR181a，miR181d，miR223，miR4947個(gè)microRNA進(jìn)行驗(yàn)證。回顧分析其與肝轉(zhuǎn)移發(fā)生與否關(guān)系，并進(jìn)一步明確其用于預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌預(yù)后的價(jià)值。⑶篩選出miR494低表達(dá)的Lovo細(xì)胞株。體外構(gòu)建miR494過(guò)表達(dá)的miR494-Lovo細(xì)胞株，分

5、析miR494對(duì)Lovo細(xì)胞功能影響。進(jìn)一步通過(guò)整合生物學(xué)分析，miR494可能作用靶點(diǎn)，引起肝轉(zhuǎn)移的機(jī)制。⑷從SEER數(shù)據(jù)庫(kù)里，提取了在2004-2007年期間原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶均接受了手術(shù)治療的2007例轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌病人的數(shù)據(jù)。采用單因素及多因素分析原發(fā)灶淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況對(duì)預(yù)后的影響。⑸共篩選了213相關(guān)的文獻(xiàn)，入組了13篇文獻(xiàn)進(jìn)行meta分析。對(duì)PET用于診斷肝內(nèi)和肝外轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確性，改變治療率及無(wú)效手術(shù)率進(jìn)行了meta分析，用于明確P

6、ET在可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人中應(yīng)用的價(jià)值。
　　結(jié)果：芯片分析結(jié)果顯示:在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移與無(wú)肝轉(zhuǎn)移兩個(gè)組間有16個(gè)差異表達(dá)的microRNA。其中miR15b，miR223，miR19a在肝轉(zhuǎn)移組表達(dá)下降，miR494在肝轉(zhuǎn)移表達(dá)上升，均可以進(jìn)一步通過(guò)石蠟組織qRT-PCR得到驗(yàn)證。并表明miR494的高表達(dá)與預(yù)后差相關(guān)。體外驗(yàn)證表明miR494可引起細(xì)胞周期改變（S期比例增加），侵襲能力的增加。對(duì)于可切除轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌，淋巴

7、結(jié)轉(zhuǎn)移（無(wú)論是轉(zhuǎn)移數(shù)目還是轉(zhuǎn)移率）均與預(yù)后差密切相關(guān)。對(duì)于傳統(tǒng)影像學(xué)檢查評(píng)估為的可切除的結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人，加用PET可以提高肝外轉(zhuǎn)移灶的靈敏度，減少不必要的“剖腹探查”術(shù)。
　　結(jié)論：①miR15b，miR223，miR19a的低表達(dá)及miR494高表達(dá)均與腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生有關(guān)。同時(shí)miR494高表達(dá)還與結(jié)直腸癌預(yù)后差相關(guān)。②miR494可引起Lovo細(xì)胞株侵襲能力增加，有可能成為區(qū)分可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移新的標(biāo)志物。③淋巴結(jié)狀