門(mén)靜脈動(dòng)脈化及腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位術(shù)對(duì)大鼠肝切除后再生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】
　　 1、建立新的、可行的、重復(fù)性好、穩(wěn)定的大鼠門(mén)靜脈動(dòng)脈化及腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位模型，為研究門(mén)靜脈不同灌流方式對(duì)肝臟再生的影響提供動(dòng)物模型。
　　 2、探討門(mén)靜脈動(dòng)脈化及腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位術(shù)對(duì)大鼠40％肝切除后肝臟再生的影響并評(píng)價(jià)門(mén)靜脈兩種灌流方式對(duì)肝臟的再生作用。
　　 【方法】
　　 1、建立大鼠門(mén)靜脈動(dòng)脈化動(dòng)物模型：以袖套法為基礎(chǔ)，采用同種異體血管套入式縫合及袖套的方法建立大鼠門(mén)靜脈動(dòng)脈化模型40例。

2、切除左腎，將左腎動(dòng)脈與門(mén)靜脈殘端通過(guò)同種異體血管連接，左腎靜脈借助袖套與腸系膜上靜脈連接。術(shù)后觀察外周血肝功能變化、肝臟病理改變、體重變化、術(shù)后生存率及MRI血管成像。
　　 2、建立大鼠腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位動(dòng)物模型：以袖套法為基礎(chǔ)建立大鼠腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位動(dòng)物模型40例，在右腎靜脈水平離斷下腔靜脈，在門(mén)靜脈第1屬支處離斷門(mén)靜脈，左腎靜脈借袖套與門(mén)靜脈連接，下腔靜脈借雙頭袖套與腸系膜上靜脈連接。術(shù)后觀察外周血肝功能變化、肝臟病理改變、體重變化

3、、術(shù)后生存率及MRI血管成像。
　　 3、建立40％肝切除后的大鼠門(mén)靜脈動(dòng)脈化及腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位模型：在上述兩種模型的基礎(chǔ)上切除大鼠40％肝臟（左葉+乳頭葉）。取100只SD大鼠，隨機(jī)取90只大鼠，隨機(jī)分為三組，每組30只。A組：門(mén)靜脈動(dòng)脈化聯(lián)合40％肝切除組，B組：腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位聯(lián)合40％肝切除組，C組：對(duì)照組：行左腎及40％肝切除組。另取10只作40％肝切除后預(yù)計(jì)的剩余肝平均重量。在術(shù)后第3、7、14天，共3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨

4、機(jī)取10只作以下指標(biāo)觀察：門(mén)靜脈壓力、肝功能測(cè)定、殘肝再生功能的評(píng)估、肝臟HE染色、Ki-67、TUNEL免疫組化染色、電鏡觀察。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn),符合正態(tài)分布計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析,兩兩比較用LSD程序進(jìn)行，以P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 【結(jié)果】
　　 1、大鼠門(mén)靜脈動(dòng)脈化模型

5、及腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位模型的評(píng)價(jià)
　　 兩種模型均造模成功。門(mén)靜脈動(dòng)脈化模型組造模成功率97.5％（39/40），腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位模型組造模成功率95％（38/40），造模成功的大鼠均存活至術(shù)后2月。術(shù)后1個(gè)月，兩模型組、假手術(shù)組白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶和膽堿酯酶、體重兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。術(shù)后2個(gè)月門(mén)靜脈動(dòng)脈化模型組門(mén)靜脈通暢率為94.9％（37/39），腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位組門(mén)靜脈通暢率為84.2％（32/38）。兩模型

6、組磁共振血管成像及病理結(jié)果均未見(jiàn)明顯異常。
　　 2、門(mén)靜脈動(dòng)脈化及腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位對(duì)大鼠40％肝切除后再生的影響
　　 2.1一般情況：A組和C組手術(shù)成功率均100％，B組手術(shù)成功率96.7％。A組門(mén)靜脈壓力較對(duì)照組明顯升高，B組門(mén)靜脈壓力在術(shù)后14天明顯降低。肝功能A組術(shù)后3天ALT明顯降低，B組術(shù)后14天ALT明顯升高，三組大鼠ALB、ALP比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。A組殘肝再生率在術(shù)后3、7天均明顯高于對(duì)照組，B組均明顯低

7、于對(duì)照組。
　　 2.2 病理：HE染色A組肝竇擴(kuò)張，小葉間靜脈擴(kuò)張明顯；B組肝細(xì)胞有較多脂肪變性及細(xì)胞凋亡，匯管區(qū)有較多淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；C組基本正常。Ki-67標(biāo)記指數(shù)A組術(shù)后3天明顯高于對(duì)照組，B組在術(shù)后7天明顯低于對(duì)照組，但在術(shù)后14天高于對(duì)照組。肝細(xì)胞凋亡指數(shù)B組在術(shù)后3、7天均高于對(duì)照組。
　　 2.3 透射電鏡觀察：A組可見(jiàn)數(shù)量較多的線粒體及雙核肝細(xì)胞。B組細(xì)胞核染色質(zhì)稍濃縮，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有輕度脫顆?，F(xiàn)象，可見(jiàn)凋

8、亡細(xì)胞。C組基本正常。
　　 【結(jié)論】
　　 1、利用同種異體的動(dòng)脈血管材料行袖套法建立大鼠門(mén)靜脈動(dòng)脈化模型，血管通暢率高，是一個(gè)可行、穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)便、可重復(fù)性強(qiáng)的模型。
　　 2、利用同種異體的上腔靜脈做成的雙頭袖套行袖套法建立大鼠腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位模型，手術(shù)時(shí)間短、成功率高、穩(wěn)定可靠，是一個(gè)可行、操作簡(jiǎn)便的模型。
　　 3、在大鼠門(mén)靜脈動(dòng)脈化聯(lián)合40％肝切除術(shù)后的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)早期ALT較對(duì)照組降低，而膽堿酯

9、酶、殘肝再生率、Ki-67標(biāo)記指數(shù)均較對(duì)照組明顯升高，電鏡檢查示線粒體增多，表明門(mén)靜脈動(dòng)脈化能增強(qiáng)肝切除術(shù)后早期殘余肝臟的能量代謝及再生能力，從而有助于提高存活率。
　　 4、在大鼠腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位聯(lián)合40％肝切除術(shù)的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)早期肝功能指標(biāo)與對(duì)照組無(wú)明顯差異，而殘肝再生率、Ki-67標(biāo)記指數(shù)均低于門(mén)靜脈動(dòng)脈化組，肝細(xì)胞凋亡指數(shù)則高于門(mén)靜脈動(dòng)脈化組，表明腔門(mén)靜脈轉(zhuǎn)位在行肝切除術(shù)后早期對(duì)肝臟的能量代謝及再生能力、手術(shù)耐受力均比門(mén)靜脈