大鼠聯(lián)合肝臟分隔和門靜脈結(jié)扎術(shù)促進(jìn)肝臟再生的實驗研究.pdf

1、目的：建立聯(lián)合肝臟分隔和門靜脈結(jié)扎的分階段肝切除術(shù)（ALPPS）大鼠模型，探討聯(lián)合肝臟分隔和門靜脈結(jié)扎術(shù)對大鼠肝臟肝再生的影響。
　　方法：SPF級健康清潔成年雄性SD大鼠75只，6-8周齡，體重230-280g，采用隨機數(shù)字表法將大鼠隨機分為3組，即假手術(shù)組（S組）、單純門靜脈結(jié)扎組（PVL組）和聯(lián)合肝臟分隔和門靜脈結(jié)扎組（ALPPS組），每組25只。PVL組：大鼠術(shù)前禁食8h，自由飲水，采用水合氯醛（0.6ml/100g）腹腔

2、注射麻醉，在動物手術(shù)燈下分別游離各葉肝動脈、肝膽管及門靜脈分支以避免損傷，采用5/0絲線選擇性結(jié)扎大鼠肝左葉，左中葉，乳突葉，右葉門靜脈分支，保留肝右中葉門靜脈分支；ALPPS組：除上述步驟外，當(dāng)左葉及左中葉門靜脈主干結(jié)扎后，左右中葉間（鐮狀韌帶右側(cè)）出現(xiàn)缺血線，沿著缺血線離斷肝實質(zhì)，采用8-0尼龍縫線沿缺血線結(jié)扎左右肝實質(zhì)后，顯微剪刀剪斷左右部分，一步一步離斷肝實質(zhì)，直至左右肝中葉間肝實質(zhì)完全離斷，離斷過程中斷面小血管分支采用8-0尼

3、龍線結(jié)扎止血或電凝止血，最后，肝左中葉斷面采用無菌塑料薄膜包裹，以防止術(shù)后斷面粘連；S組：僅行開關(guān)腹及肝周游離。各組分別于術(shù)后1d、3d、7d、10d、14d分別麻醉處死5只大鼠，收集各時間點靜脈血4ml，3000轉(zhuǎn)離心10min后，取上層血清-80℃保存?zhèn)錂z。切取右中肝葉，稱取質(zhì)量后部分肝組織24 h內(nèi)行石蠟包埋，部分肝組織經(jīng)液氮速凍后放置于-80℃保存。測定術(shù)后各時間點肝右中葉質(zhì)量，并計算肝再生率。檢測血清肝功能指標(biāo)血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶

4、（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）及血清白蛋白（Alb）、總膽紅素（TBil）水平，采用ELISA試劑盒檢測血清中IL-6、HGF及VEGF的表達(dá)水平。采用real-time PCR檢測術(shù)后各時間點肝右中葉組織中 IL-6、HGF、TNF-α及 TGF-βmRNA的表達(dá)水平，剩余肝組織應(yīng)用石蠟切片 HE染色及免疫組化測定肝組織 PCNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1．術(shù)后所有大鼠均存活，活動、精神及食欲良好。切口愈合良好

5、，無感染等并發(fā)癥發(fā)生。
　　2．ALPPS組和 PVL組術(shù)后各時間右中葉重量均明顯增大，肝再生率均明顯高于S組。與PVL組相比，ALPPS組術(shù)后第3d、7d、10d、14d右中葉再生明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3．與S組相比，ALPPS組和PVL組術(shù)后第1d、3d血清ALT、AST濃度均明顯增高（P<0.05）。術(shù)后第1d，ALPPS組血清ALT、AST濃度明顯高于PVL組（P<0.05），隨后均逐漸下降，

6、術(shù)后第7d逐漸恢復(fù)至正常水平。術(shù)后第1、3天ALPPS組和PVL組血清Alb濃度明顯低于S組，且ALPPS組血清Alb濃度明顯低于 PVL組（ P<0.05）。三組術(shù)后血清 TBil濃度差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　4．與S組相比，ALPPS組和PVL組術(shù)后第1d、3d血清IL-6、HGF及VEGF的表達(dá)水平明顯增高（P<0.05），且術(shù)后第1d、3d，ALPPS組血清中IL-6、HGF及VEGF的表達(dá)水平明顯高于PV

7、L組（P<0.05），兩組隨后均逐漸下降，術(shù)后第7d逐漸恢復(fù)至正常水平。
　　5．與S組相比，PVL組和ALPPS組術(shù)后1d、3d的IL-6、HGF、TNF-α及TGF-βmRNA表達(dá)均上調(diào)（P<0.05），且術(shù)后第1d達(dá)到峰值，隨后均降低。ALPPS組術(shù)后1d、3d各因子mRNA表達(dá)水平均明顯高于PVL組（P<0.05）。
　　6．PVL組和ALPPS組術(shù)后第1d前PCNA陽性表達(dá)保持低表達(dá)水平，差異無統(tǒng)計學(xué)差異，之后逐漸

8、增高，于術(shù)后第3d達(dá)高峰，且ALPPS組PCNA陽性表達(dá)明顯高于PVL組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　7．光鏡下ALPPS組術(shù)后1d左中葉出現(xiàn)肝索結(jié)構(gòu)紊亂、肝細(xì)胞氣球樣變性水腫、脂肪變、竇周隙變窄，淤血、肝葉多處灶狀壞死。而PVL組術(shù)后1d出現(xiàn)肝細(xì)胞腫脹、氣球及空泡樣變性、竇周隙變窄、無結(jié)構(gòu)紊亂，與ALPPS組比較壞死區(qū)域較小。兩組術(shù)后第3d細(xì)胞形態(tài)及肝索結(jié)構(gòu)、淤血及壞死均較前一天減輕
　　結(jié)論：
　　1．