膽管聯(lián)合門靜脈結(jié)扎對Buffalo大鼠肝再生及肝癌生長轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的:利用活體成像技術(shù)，建立可供活體觀察的Buffalo大鼠原位肝癌模型。在此基礎(chǔ)上，觀察選擇性結(jié)扎植瘤肝葉的膽管和門靜脈(Bile Duct Ligation withPortal Vein Ligation，BPL)，與單純結(jié)扎門靜脈(Portal Vein Ligation，PVL)比較，對肝再生及肝癌生長、轉(zhuǎn)移的影響。
　　方法:以pCDH-puromycin-CMV為載體，將熒光素酶(Lucferase，Luc)基因轉(zhuǎn)染

2、至大鼠McA-RH7777肝癌細(xì)胞，將其皮下接種Buffalo大鼠，取瘤塊異體種植于大鼠肝臟左外葉，應(yīng)用Luc活體熒光成像技術(shù)，結(jié)合吲哚菁綠近紅外成像，觀察肝腫瘤生長和轉(zhuǎn)移情況。建模成功后，隨機(jī)將大鼠分為三組，即左外側(cè)葉和中葉膽管聯(lián)合門靜脈結(jié)扎組(BPL)、單純門靜脈結(jié)扎組(PVL)和假手術(shù)組(Sham)。分別于結(jié)扎術(shù)后1d、3d、5d、7d、14d取血后處死大鼠，解剖肝、肺，測量各肝葉重量、肝內(nèi)種植腫瘤體積變化，觀察有無肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移。測

3、定血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT和AST)、膽汁酸、肝內(nèi)膽汁酸水平。取保留側(cè)肝組織，Western blot測定PCNA表達(dá)量，免疫組化檢測ki67陽性細(xì)胞數(shù)。
　　結(jié)果:(1) Buffalo大鼠皮下和肝內(nèi)種植成瘤率均為100％。肝內(nèi)種植2w后，利用熒光素酶活體成像系統(tǒng)，可觀察到接種肝葉內(nèi)的熒光信號，并隨時間推移信號范圍和強(qiáng)度增加;利用吲哚菁綠近紅外成像系統(tǒng)，也可見種植部位的腫瘤顯影，其他肝葉未見腫瘤。4w時腫瘤仍呈局部生長，未見明顯的肝內(nèi)

4、和肺轉(zhuǎn)移。(2) PVL與BPL均引起肝臟萎縮-增生綜合征(AUG，Atropy/hypertrophy complex)，但BPL組發(fā)生得更快、更明顯。術(shù)后血清轉(zhuǎn)氨酶水平出現(xiàn)一過性升高。BPL和PVL組均顯示血清膽汁酸水平顯著高于Sham組，BPL組于術(shù)后1d升至峰值，為123.8±14.6μmol/L，而PVL組于術(shù)后3d升至峰值，為73.8±8.2μmol/L，Sham組為24.6±1.4μmol/L。類似血清膽汁酸變化，BPL組

5、未結(jié)扎側(cè)肝組織膽汁酸含量于術(shù)后1d升至峰值，為0.83±0.074μmol/g，隨后迅速降低，而PVL組肝組織膽汁酸術(shù)后3d最高，為0.58±0.13μmol/g。結(jié)扎術(shù)后14d，血清轉(zhuǎn)氨酶及膽汁酸均降至正常水平。(3) PCNA表達(dá)量及ki-67陽性細(xì)胞數(shù)，BPL組均比PVL組提前達(dá)峰值。(4)結(jié)扎術(shù)后7d，BPL和PVL組腫瘤體積明顯大于Sham組(P＜0.05)，但兩組間未見明顯差異(P＞0.05)。然而術(shù)后14d，BPL組腫瘤體

6、積明顯大于PVL組(P＜0.05),并且出現(xiàn)腫瘤肺部轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為100％(4/4)。
　　結(jié)論:(1)原位接種Luc-McA-RH7777細(xì)胞能在Buffalo大鼠肝內(nèi)成瘤，并可通過Luc活體熒光成像系統(tǒng)觀察腫瘤生長情況，但與ICG肝腫瘤成像類似，其強(qiáng)度均不同程度地受動物體壁厚度的影響，經(jīng)皮觀察肝內(nèi)腫瘤，Luc熒光成像較ICG遠(yuǎn)紅外成像敏感。(2) BPL在加速結(jié)扎肝葉萎縮的同時，比PVL更有效地促進(jìn)非結(jié)扎側(cè)肝葉的再生。(3)