血漿中游離藥物濃度分析方法及其與藥物藥效學(xué)關(guān)系的研究.pdf

1、目的:藥物進(jìn)入機(jī)體血液后，部分與蛋白等成分結(jié)合，部分以游離的形式存在，只有游離的藥物才能穿過組織液膜或與受體結(jié)合進(jìn)而發(fā)揮藥理作用，因此，血漿中游離藥物濃度(Cf)是目前公認(rèn)的體內(nèi)藥效學(xué)及安全性評(píng)估的主要依據(jù)。然而監(jiān)測Cf在臨床實(shí)踐中并未得到普及，其中一個(gè)重要的原因是表征Cf的方法仍不完善，進(jìn)而阻礙了用Cf監(jiān)測和進(jìn)一步研究臨床藥物治療中藥物藥效學(xué)的變化。因此，血漿中Cf分析方法及其與藥物藥效學(xué)關(guān)系的研究是目前臨床藥學(xué)工作的研究熱點(diǎn)。

2、>　　Cf的分析方法主要包括平衡透析法、超濾法(UF)、超速離心法和凝膠過濾法。UF是分析Cf最簡單快速的方法，其中離心超濾(CF-UF)和中空纖維離心超濾(HFCF-UF)是目前表征Cf最常用的方法。文獻(xiàn)報(bào)道CF-UF得到的超濾液體積（Vu）各不一致（約70-300μL），其過大可能破壞藥物蛋白結(jié)合平衡，影響Cf分析的準(zhǔn)確度和精密度。在混合的正常血漿中研究結(jié)果表明Vu主要依賴于離心力和離心時(shí)間，因此在應(yīng)用CF-UF時(shí)可以通過改變離心力

3、或離心時(shí)間控制Vu。文獻(xiàn)報(bào)道HFCF-UF獲得的Vu可以通過玻璃管和中空纖維的內(nèi)徑控制，分析結(jié)果更準(zhǔn)確。然而上述所有分析結(jié)果的評(píng)價(jià)都是在健康志愿者的血漿中進(jìn)行的，健康志愿者的血漿條件變化很小;而對(duì)于臨床樣本，由于臨床患者的病理生理?xiàng)l件非常復(fù)雜，不同的疾病條件導(dǎo)致患者的血漿條件（蛋白水平、粘度、膽固醇水平、滲透壓等）具有很大的個(gè)體差異，且與健康志愿者的血漿條件顯著不同。然而在復(fù)雜的疾病條件下UF能否正確表征Cf未見研究報(bào)道。
　　臨

4、床患者血漿中白蛋白濃度具有很大的差異，已知白蛋白濃度能夠影響藥物蛋白結(jié)合率(PB)，從而影響Gf。因此，長期以來，研究的焦點(diǎn)都是白蛋白濃度對(duì)Cf的影響，并試圖建立一個(gè)校正模型。不同白蛋白濃度下準(zhǔn)確的分析方法是表征血漿中真實(shí)Cf的前提，然而白蛋白濃度對(duì)分析Cf方法學(xué)的影響及規(guī)律未見研究報(bào)道。
　　在常規(guī)的TDM中發(fā)現(xiàn)，對(duì)于某些個(gè)體差異大，毒副反應(yīng)嚴(yán)重的藥物，有時(shí)盡管血漿中總藥物濃度(Ct)適宜，但患者還是出現(xiàn)了不同程度的毒副反應(yīng)或治

5、療失敗。這主要是由于藥物進(jìn)入體內(nèi)，真正發(fā)揮藥效的部分是血漿中Cf，其直接決定藥物的療效與毒副反應(yīng)的發(fā)生。在健康狀態(tài)下，藥物的PB變化不大，Cf與呈一定的相關(guān)性，Ct在一定水平上可以反映Cf。但是在某些特殊的情況下，如低蛋白血癥、酸血癥、肝硬化、腎衰竭、吸煙、多種藥物聯(lián)合應(yīng)用等，藥物在血漿中的Cf與Ct并不呈現(xiàn)很好的相關(guān)性，此時(shí)若用血漿中Ct去預(yù)測或評(píng)價(jià)其藥效學(xué)往往是片面的，而用Cf代替Ct更為科學(xué)有效。Cf與疾病條件的關(guān)系是臨床用藥安全

6、有效的關(guān)鍵問題，因此，研究Cf與藥效學(xué)的關(guān)系并探討藥物藥效學(xué)個(gè)體差異的機(jī)制，具有更重要的臨床參考意義。
　　方法:課題以萬古霉素(VCM)為模型藥物，通過正常血漿建立、驗(yàn)證了CF-UF和HFCF-UF分析血漿中游離的VCM，研究了不同疾病條件對(duì)CF-UF和HFCF-UF表征Cf準(zhǔn)確度的影響。方法通過收集不同疾病條件患者的血漿，同時(shí)記錄患者的病理生理狀況。血漿分別采用CF-UF和HFCF-UF處理，記錄Vu，進(jìn)行HPLC分析。

7、>　　課題以丙戊酸鈉(VPA)為模型藥物，使用正常血漿建立、驗(yàn)證了CF-UF和HFCF-UF分析血漿中游離VPA，研究了白蛋白濃度對(duì)超濾法表征Cf準(zhǔn)確度的影響及規(guī)律。方法通過模擬不同白蛋白濃度(10、20、40、50、60 g·L-1)的質(zhì)控血漿樣本，分別采用CF-UF和HFCF-UF處理，進(jìn)行HPLC分析。
　　分析臨床上接受VCM治療患者的血漿中的Cf和Ct，考察其相關(guān)性，并對(duì)患者生理病理情況和VCM游離分?jǐn)?shù)進(jìn)行回歸分析，探討

8、患者的病理生理?xiàng)l件（年齡、性別、疾病等因素）對(duì)游離分?jǐn)?shù)的影響。
　　結(jié)果:結(jié)果表明疾病條件對(duì)CF-UF有顯著的影響，不同患者獲得Vu具有很大的差異(97-279μL)，高血壓及高血脂患者的血漿獲得的Vu通常小于低蛋白血癥患者的血漿獲得的Vu，血漿蛋白總濃度和血漿滲透壓是影響Vu的重要指標(biāo)。疾病條件對(duì)HFCF-UF影響較小，所有患者的血漿獲得的Vu均在50μL左右，因此，HFCF-UF更能準(zhǔn)確表征血漿中真實(shí)的Cf。
　　結(jié)果表

9、明當(dāng)白蛋白濃度大于40 g·L-1時(shí)，兩個(gè)方法測定結(jié)果無差異;但是在低蛋白水平(＜40 g·L-1)時(shí)，隨著白蛋白濃度的降低，兩個(gè)方法測定結(jié)果的差異越來越大。CF-UF比HFCF-UF更容易受到白蛋白濃度的影響，由于HFCF-UF可以控制Vu，受白蛋白濃度影響可以忽略不計(jì)，在應(yīng)用CF-UF時(shí)，對(duì)低蛋白濃度的血漿樣本需更嚴(yán)格控制Vu，避免錯(cuò)誤的評(píng)估結(jié)果。本文將HFCF-UF成功的應(yīng)用于游離VPA臨床TDM，為臨床游離VPA的監(jiān)測提供一個(gè)可