力學敏感性lnc RNA MALAT1和NEAT1調(diào)控頸椎后縱韌帶骨化機制的研究.pdf

1、目的：頸椎后縱韌帶骨化癥(ossification of the posterior longitudinal ligament，OPLL)是常見的脊柱疾病，尤其是在亞洲人群中發(fā)生較為多見，對患者健康有嚴重危害。本人所在課題組之前的研究發(fā)現(xiàn)應力加載對OPLL的發(fā)生及發(fā)展起重要影響，并建立了體外機械牽張拉力誘導的頸椎后縱韌帶成纖維細胞(FC)的成骨分化模型。雖然前期研究對力學因素導致的后縱韌帶骨化有了一定的詮釋，但是仍未能解釋清楚其確切的

2、機制，需要進一步探索。長鏈非編碼RNA(long-noncoding RNA，lncRNA)是指長度大于200nt的、非編碼的RNA，能夠參與并調(diào)控基因的表達，目前尚未有報道lncRNA在后縱韌帶骨化病發(fā)生過程中的作用以及機制。因此本項研究將探討lncRNA在應力加載所導致的后縱韌帶骨化進程中的作用及機制。
　　方法：提取頸椎后縱韌帶組織總RNA，利用lncRNA芯片檢測骨化組織以及非骨化組織中l(wèi)ncRNA的表達差異。利用實時熒光

3、定量PCR進行驗證。分離并培養(yǎng)頸椎后縱韌帶成纖維細胞，加載機械牽張拉力后檢測lncRNA的表達變化。利用starbase軟件分析lncRNA相結(jié)合的miRNA，然后利用Targetscan軟件分析miRNA的靶基因。通過siRNA調(diào)控韌帶成纖維細胞中l(wèi)ncRNA的表達，并檢測相關miRNA以及靶基因的表達，調(diào)控韌帶成纖維細胞中miRNA的表達并構建miRNA熒光素酶報告載體驗證miRNA的靶基因。
　　結(jié)果： lncRNA芯片檢測

4、結(jié)果表明頸椎PLL骨化及非骨化組織中l(wèi)ncRNA差異性表達。lncRNA MALAT1和NEAT1在頸椎PLL骨化組織中的表達顯著性高于非骨化組織。機械應力可以顯著提高lncRNA MALAT1和NEAT1在頸椎后縱韌帶FC中的表達。利用starbase軟件分析發(fā)現(xiàn)lncRNA MALAT1可以和miR-30a-5p結(jié)合。利用Targetscan軟件分析miR-30a-5p存在靶基因RUNX2。機械牽張拉力促進韌帶成纖維細胞中l(wèi)ncRN