力學(xué)敏感性lnc RNA MALAT1和NEAT1調(diào)控頸椎后縱韌帶骨化機(jī)制的研究.pdf

1、目的：頸椎后縱韌帶骨化癥(ossification of the posterior longitudinal ligament，OPLL)是常見(jiàn)的脊柱疾病，尤其是在亞洲人群中發(fā)生較為多見(jiàn)，對(duì)患者健康有嚴(yán)重危害。本人所在課題組之前的研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)力加載對(duì)OPLL的發(fā)生及發(fā)展起重要影響，并建立了體外機(jī)械牽張拉力誘導(dǎo)的頸椎后縱韌帶成纖維細(xì)胞(FC)的成骨分化模型。雖然前期研究對(duì)力學(xué)因素導(dǎo)致的后縱韌帶骨化有了一定的詮釋，但是仍未能解釋清楚其確切的

2、機(jī)制，需要進(jìn)一步探索。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long-noncoding RNA，lncRNA)是指長(zhǎng)度大于200nt的、非編碼的RNA，能夠參與并調(diào)控基因的表達(dá)，目前尚未有報(bào)道lncRNA在后縱韌帶骨化病發(fā)生過(guò)程中的作用以及機(jī)制。因此本項(xiàng)研究將探討lncRNA在應(yīng)力加載所導(dǎo)致的后縱韌帶骨化進(jìn)程中的作用及機(jī)制。
　　方法：提取頸椎后縱韌帶組織總RNA，利用lncRNA芯片檢測(cè)骨化組織以及非骨化組織中l(wèi)ncRNA的表達(dá)差異。利用實(shí)時(shí)熒光

3、定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證。分離并培養(yǎng)頸椎后縱韌帶成纖維細(xì)胞，加載機(jī)械牽張拉力后檢測(cè)lncRNA的表達(dá)變化。利用starbase軟件分析lncRNA相結(jié)合的miRNA，然后利用Targetscan軟件分析miRNA的靶基因。通過(guò)siRNA調(diào)控韌帶成纖維細(xì)胞中l(wèi)ncRNA的表達(dá)，并檢測(cè)相關(guān)miRNA以及靶基因的表達(dá)，調(diào)控韌帶成纖維細(xì)胞中miRNA的表達(dá)并構(gòu)建miRNA熒光素酶報(bào)告載體驗(yàn)證miRNA的靶基因。
　　結(jié)果： lncRNA芯片檢測(cè)

4、結(jié)果表明頸椎PLL骨化及非骨化組織中l(wèi)ncRNA差異性表達(dá)。lncRNA MALAT1和NEAT1在頸椎PLL骨化組織中的表達(dá)顯著性高于非骨化組織。機(jī)械應(yīng)力可以顯著提高lncRNA MALAT1和NEAT1在頸椎后縱韌帶FC中的表達(dá)。利用starbase軟件分析發(fā)現(xiàn)lncRNA MALAT1可以和miR-30a-5p結(jié)合。利用Targetscan軟件分析miR-30a-5p存在靶基因RUNX2。機(jī)械牽張拉力促進(jìn)韌帶成纖維細(xì)胞中l(wèi)ncRN