香豆素類和查爾酮類化合物與生物大分子的相互作用及其構(gòu)效關(guān)系研究.pdf

1、目的：在模擬人體生理條件下，研究兩種香豆素類有效成分歐前胡素(imperatorin)和異歐前胡素(isoimperatorin)及三種查爾酮類化合物查爾酮(chalcone)、4 ′-甲氧基查爾酮(4 ′-methoxychalcone)和4 ′-氯查爾酮(4 ′-ch lorochalcone)與生物大分子小牛胸腺DNA(ct-DNA)、牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HAS)、溶菌酶(LYSO)的相互作用，并探討它們之間的構(gòu)

2、效關(guān)系；利用五種化合物與HAS的相互作用，建立定量測定生物樣品中HAS的熒光光譜法。
　　 方法：采用紫外差譜法觀察歐前胡素和異歐前胡素與DNA作用前后紫外吸收光譜的變化；利用熒光光譜法獲得兩種香豆素類有效成分與DNA作用的相關(guān)參數(shù)及作用力類型，考察Mg 2+等七種金屬離子對歐前胡素和異歐前胡素與DNA作用的影響；通過鹽效應、DNA熱變性溫度、黏度法等實驗確定歐前胡素和異歐前胡素與DNA的作用模式。采用紫外差譜法觀察歐前胡素、異

3、歐前胡素、查爾酮、4 ′′′′-甲氧基查爾酮、4 ′′′′-氯查爾酮與血清白蛋白(SA)以及三種查爾酮類化合物與LYSO作用前后紫外吸收光譜的變化；利用熒光光譜法考察五種化合物與SA 以及三種查爾酮類化合物與LYSO 相互作用的猝滅機制和相關(guān)參數(shù)；考察Mg 2+等七種金屬離子對五種化合物與SA 相互作用的影響及系列金屬離子對三種查爾酮類化合物與LYSO 相互作用的影響；利用同步熒光法考察五種化合物對SA及三種查爾酮類化合物對LYSO構(gòu)象

4、的影響。利用五種化合物與HAS的相互作用，采用所建立的熒光光譜法定量測定生物樣品中HAS的含量。
　　 結(jié)果：五種化合物均與金屬離子形成1:1的復合物；紫外實驗結(jié)果表明，加入DNA后，歐前胡素和異歐前胡素的紫外光譜發(fā)生減色效應，說明歐前胡素和異歐前胡素均與DNA 發(fā)生作用；熒光實驗結(jié)果表明，歐前胡素和異歐前胡素使DNA-小檗堿體系熒光強度猝滅，表明歐前胡素和異歐前胡素對小檗堿與DNA的結(jié)合為競爭性抑制；黏度實驗表明，歐前胡素和異

5、歐前胡素使DNA的黏度先增大后減小。紫外結(jié)果表明五種化合物與SA，三種查爾酮類化合物與LYSO 均發(fā)生相互作用。熒光光譜結(jié)果表明：五種化合物對SA，三種查爾酮類化合物對LYSO的熒光猝滅機制均為靜態(tài)猝滅和非輻射能量轉(zhuǎn)移，作用力類型均為氫鍵和范德華力。五種化合物與BSA的結(jié)合常數(shù)K分別為1.48×104、1.04×104、3.16×105、3.02×105和2.94×105 L ·moL-1，結(jié)合位點數(shù)n分別為0.915、0.742、0.

6、996、0.999和0.991，結(jié)合距離r分別為0.73、0.66、3.35、3.22和3.39 nm；與HAS的結(jié)合常數(shù)K分別為2.45×103、2.27×103、2.50×104、0.697×104、0.277×104L ·moL-1，結(jié)合位點數(shù)n分別為0.930、0.776、1.00、0.980和1.02，結(jié)合距離r分別為2.97、2.74、3.93、3.78和4.25nm；三種查爾酮類化合物與LYSO的結(jié)合常數(shù)K分別為2.90×

7、104、2.08×104、1.29×104 L ·moL-1，結(jié)合位點數(shù)n分別為0.713、0.787和0.654，結(jié)合距離r分別為4.23、4.45和4.25nm。同步熒光結(jié)果表明：五種化合物均使SA的構(gòu)象改變，三種查爾酮類化合物均使LYSO的構(gòu)象發(fā)生變化。利用所建立的熒光光譜法測得生物樣品中HAS的平均百分質(zhì)量分數(shù)為97.3％、96.2％、94.9％、99.2％和93.0％，平均回收率為(98.5±3.67)％、(99.5±2.92

8、)％、(99.6±2.14)％、(100±1.4)％和(99.7±2.03)％，相對標準偏差為3.7％、2.9％、2.2％、1.4％和2.0％。
　　 結(jié)論：歐前胡素和異歐前胡素均與DNA 發(fā)生結(jié)合作用，金屬離子的加入對歐前胡素和異歐前胡素與DNA的結(jié)合作用均產(chǎn)生不同程度的影響。鹽效應、DNA 熔點實驗、黏度法等實驗表明歐前胡素和異歐前胡素與DNA的作用模式為嵌插與靜電混合作用模式。五種化合物與SA，三種查爾酮類化合物與LYSO