重組人N-端缺失脂肪細胞補體相關(guān)蛋白的研制.pdf

1、隨人們生活水平的提高,糖尿病等代謝性疾病越來越嚴重威脅人類健康,其病理機制及防治手段一直是人們研究的熱點.脂肪細胞補體相關(guān)蛋白質(zhì)(adipocyte complement related protein 30,Acrp30,又名apM1)是近年來發(fā)現(xiàn)的具有多種生物功能的激素.它由脂肪細胞合成并分泌,作用于肌肉和肝臟,可促進肌肉內(nèi)游離脂肪酸的氧化,抑制肝糖異生的酶類,抑制肝葡萄糖的輸出,從而改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài),降低血糖、血游離脂肪酸和血甘

2、油三酯.apM1蛋白質(zhì)分子由4個部分組成:信號肽、無同源結(jié)構(gòu)域、膠質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域和球狀結(jié)構(gòu)域.動物實驗顯示,球狀結(jié)構(gòu)域(gapM1)較全長蛋白質(zhì)有更強的促進肌肉脂肪酸氧化的功能,更有效地降低血糖和血漿游離脂肪酸.因此,gapM1有望成為一種新型的降脂和降糖藥物.我們應(yīng)用RT-PCR的方法,構(gòu)建人gapM1 cDNA克隆,分別用pLY4/JF1125、pGEX4T-1/BL21、pET28a(+)/BL21及pET32a(+)/BL21等

3、原核表達系統(tǒng)表達.通過比較,選取高效表達重組gapM1(r-gapM1)的gapM1-pET28a(+)/BL21陽性克隆進行表達,并對其表達產(chǎn)物進行純化和生物學(xué)活性研究.r-gapM1以包涵體形式存在,應(yīng)用8M尿素進行變性溶解,復(fù)性后通過分子篩、離子交換層析柱純化,1升發(fā)酵液中約得到50mg純度達90％以上的r-gapM1.生物學(xué)活性研究初步證明,r-gapM1有促進血漿游離脂肪酸氧化的功能,為今后r-gapM1的應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ).