4株NDV流行株的全基因測(cè)序分析及鴨源NDV HN蛋白的原核表達(dá).pdf

1、新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒引起的能夠感染多種禽類的一種急性、高度傳染性疫病，是危害世界養(yǎng)禽業(yè)的重要傳染病之一，給許多國(guó)家的養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。NDV對(duì)多種禽類都具有致病性，除家禽外，至少250種鳥(niǎo)類可自然或?qū)嶒?yàn)感染NDV。基因Ⅶ型NDV是我國(guó)當(dāng)前流行最廣的毒株。
　　 為研究近年來(lái)NDV的遺傳進(jìn)化趨勢(shì)，本文通過(guò)克隆測(cè)序測(cè)定了兩株基因Ⅶ型雞源新城疫分離株Chicken/China/SD0

2、4/2011和Chicken/China/SDWF07/2011及兩株基因Ⅵ型鴿源新城疫分離株P(guān)igeon/China/SDLC/2011和Pigeon/China/SDS/2011的全基因序列。4株病毒與中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒F48E8、國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒Hefts/33及疫苗株chicken/N.Ireland/Ulster/67、B、Clone30、LaSota、Mukteswar核苷酸序列同源性在80％～87％之間;其F蛋白前體F0裂解位點(diǎn)附近

3、的氨基酸序列均為112RRQKRF117，符合NDV強(qiáng)毒株的特征;兩株雞源病毒屬于基因Ⅶd亞型變異株;兩株鴿源毒株NP、P、L基因上某些氨基酸的改變與其宿主特異性及毒力方面的差異可能有關(guān)?？乖儺惙治鼋Y(jié)果顯示與單抗1E5反應(yīng)陰性，初步推測(cè)并不是由HN蛋白347位氨基酸變異E→K(G)引起的，可能還有其他未知的因素決定了病毒與單抗1E5的反應(yīng)特性。Pigeon/China/SDS/2011對(duì)鴿和雞的人工感染試驗(yàn)結(jié)果顯示其對(duì)鴿具有較強(qiáng)的致病

4、性而對(duì)雞的致病性較弱。
　　 2009年本實(shí)驗(yàn)室從發(fā)生NDV的鴨場(chǎng)分離得到一株鴨源新城疫病毒SD03，序列分析與致病性指數(shù)測(cè)定結(jié)果顯示為強(qiáng)毒株。但其對(duì)櫻桃谷鴨的攻毒試驗(yàn)顯示，在實(shí)驗(yàn)條件下SD03分離株對(duì)鴨不致病，只表現(xiàn)排毒。在本試驗(yàn)中用原核表達(dá)載體pET28a對(duì)其HN蛋白開(kāi)放閱讀框內(nèi)176～571位氨基酸（包含有5個(gè)與受體結(jié)合有關(guān)的區(qū)域）進(jìn)行了表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)在49kDa位置處有明顯表達(dá)帶，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)鎳柱親和