重組人參多肽的研究.pdf

1、人參多肽（ginsengpeptide）由14個氨基酸組成，是一種極具潛力的降血糖藥物.首先，將pBluescript-gsp經(jīng)限制型內(nèi)切酶HindⅢ和NotⅠ酶切后與經(jīng)同樣酶切處理的pPIC9連接，形成重組質(zhì)粒pPIC9-gsp.把pPIC9-gsp用BglⅡ酶切線性化后電穿孔轉(zhuǎn)化入巴斯德畢赤酵母GS115.經(jīng)篩選得到his<'+>Mut<'s>表型的陽性克隆.小規(guī)律地培養(yǎng)重組菌株后進行目的蛋白的誘導(dǎo)表達，用Tricine-SDS-P

2、AGE凝膠電泳分析誘導(dǎo)液.目的蛋白是含有59個氨基酸，分子量為5.9kD的小肽.經(jīng)酶切和凝膠電泳分析驗證了分泌蛋白的正確性.通過對誘導(dǎo)培養(yǎng)基中氮源的優(yōu)化，目的蛋白的表達量由345mg/l提高到750mg/l.此外，批次發(fā)酵的研究表明重組菌株可用于重復(fù)5次連續(xù)發(fā)酵生產(chǎn)目的蛋白.通過該研究，構(gòu)建了結(jié)構(gòu)正確的重組質(zhì)粒pPIC9-gsp，篩選出了陽性克隆菌株，探索了目的蛋白的誘導(dǎo)表達與分析過程中的相關(guān)技術(shù)手段.并對發(fā)酵優(yōu)化及相關(guān)方面做出了初探.