膽汁內外引流術對梗阻性黃疸大鼠腸屏障功能的影響.pdf

1、背景：梗阻性黃疸(Obstructive Jaundice,OJ,以下簡稱梗黃)是臨床常見疾病,后期患者容易發(fā)生感染、肝腎功能不全甚至并發(fā)多器官功能衰竭,死亡率很高。且梗黃患者術后并發(fā)癥多,大量研究表明,這與梗黃發(fā)病過程中腸黏膜屏障損傷進而引起細菌和內毒素經門靜脈入血,導致炎性細胞因子的“瀑布樣”效應,形成所謂“腸源性膿毒癥”有關。其中膽鹽、氧化應激、炎性介質、腸道微生態(tài)改變與腸屏障的改變有密切關系,研究梗黃時腸黏膜屏障損傷有十分重要的

2、意義。目前解除膽道梗阻有膽汁內引流術和膽汁外引流術兩種方法,多數(shù)學者的研究表明,膽汁內引流術效果優(yōu)于外引流。膽汁內引流術與外引流術的根本區(qū)別在于膽汁是否重新進入腸道,膽汁酸作為信號分子可以通過多種途徑調節(jié)機體免疫功能、調節(jié)體內能量代謝以及抑制腸道細菌過度增殖等作用。因此,我們提出假設:膽汁酸作為信號分子與膽汁酸受體(Farnesoid X Receptor,FXR,也即法尼酯衍生物X受體)結合后激活信號傳導通路,調節(jié)FXR在小腸上皮細胞

3、的表達,促進腸道屏障的修復并減少細菌移位。
　　 目的：利用既往改進的梗黃及膽汁內外引流動物模型,觀察大鼠腸黏膜組織形態(tài)、腸道機械屏障(閉鎖蛋白Occludin)、總膽汁酸(Toral Bile Acid,TBA)及其受體FXR和細菌移位的變化,進而探討膽汁內引流術優(yōu)于外引流術的機制,為臨床治療方式的選擇提供實驗依據(jù)。
　　 方法：采用成年雄性Sprague—Dawley大鼠59只,隨機分為4組,即假手術組(SH,n=1

4、4)、梗阻性黃疸組(OJ,n=14)、膽汁外引流組(ED,n=15)和膽汁內引流組(ID,n=16)。建立動物模型:第一次手術建立OJ模型(分離膽管并結扎、切斷)和SH模型(只分離膽管不結扎),OJ術后7天行第二次手術,建立ID模型(膽管與十二指腸間建立引流)和ED模型(膽管插管經皮引流至體外)。模型建立成功后取門靜脈血和下腔靜脈血做細菌培養(yǎng),用ELASA方法檢測血清TBA并計數(shù)白細胞數(shù)目(WBC)。取末端回腸常規(guī)病理染色分析腸絨毛組織

5、形態(tài)學變化,免疫組化方法檢測Occludin和FXR在腸道的表達。
　　 結果：成功建立四組大鼠模型。膽管梗阻形成后OJ組WBC(11.4±2.7×109/L)、TBA(118.9±39.0μmol/L)、Chiu腸黏膜損傷評分(2.1±1.1分)和血培養(yǎng)細菌陽性率(57.1％)較假手術組WBC(5.5±1.0×109/L)、TBA(38.0±15.0μmol/L)、Chiu評分(0.4±0.8分)和細菌陽性率(0％)均明顯升高

6、(P<0.05)。而回腸黏膜絨毛高度(297.9±49.0μm)、絨毛高/寬度比值(3.8±1.2)、FXR(0.33±0.06)和Occludin表達(O.15±0.02)較假手術組絨毛高度(389.9±60.5μm)、高/寬比(5.1±1.2)、FXR(0.39±0.06)和Occludin表達(0.22±0.05)均明顯下降(p<0.05)。行膽汁內引流術后,腸絨毛高度、高/寬比值、FXR和Ocdudin表達均與對照組(SH組)無

7、顯著差異(P>0.05),WBC、TBA和Chiu評分與SH組有差異但是均趨向于SH組水平,血培養(yǎng)細菌陽性率增加至62.5％。ED組WBC、TBA、絨毛高度、高/寬比、Chiu評分、FXR和Occludin表達均與SH組差異顯著(P<0.05),血培養(yǎng)細菌陽性率增加至(80％)。四組門靜脈與腔靜脈血血培養(yǎng)陽性率及細菌種類均相同。
　　 結論：梗黃形成后,膽汁大量淤積造成全身炎癥反應,白細胞數(shù)升高,同時腸道缺乏膽汁使FXR表達減弱