膽汁內(nèi)外引流術(shù)對梗阻性黃疸小鼠腸道FXR及TLR4表達(dá)的影響.pdf

1、本研究屬于梗阻性黃疸(Obstructive Jaundice，OJ，梗黃)系列研究。我們前期研究發(fā)現(xiàn)膽汁內(nèi)引流術(shù)優(yōu)于外引流術(shù)，機(jī)制與膽汁酸調(diào)節(jié)肝臟枯否細(xì)胞和腸道免疫系統(tǒng)功能有關(guān)。本研究假設(shè):膽汁酸通過調(diào)節(jié)膽汁酸核受體(法尼酯衍生物X受體，F(xiàn)arnesoid XReceptor，F(xiàn)XR)和病原模式識別受體Toll樣受體4(Toll-Like receptor4，TLR4)在腸黏膜上皮細(xì)胞的表達(dá)，改善腸黏膜的屏障功能。
　　目的:通

2、過小鼠梗黃及膽汁內(nèi)外引流模型，觀察小鼠腸黏膜FXR與TLR4的表達(dá)變化并探討兩者之間的相互作用，闡明膽汁內(nèi)引流術(shù)優(yōu)于外引流術(shù)的分子機(jī)制。
　　方法:采用成年雄性昆明小鼠60只隨機(jī)分為四組，即梗黃組(OJ)，膽汁外引流組(ED)，膽汁內(nèi)引流組(ID)和假手術(shù)組(SH)，每組15只。建立小鼠模型:首次手術(shù)建立OJ組和SH組，手術(shù)后第9天部分OJ組小鼠行內(nèi)外引流術(shù)，建立ID組和ED組。SH、OJ組在首次手術(shù)后第9天處死小鼠并采集標(biāo)本，而

3、ID、ED組在引流術(shù)后第9天取標(biāo)本，心臟取血檢測肝功能，取末端回腸組織行HE染色觀察腸黏膜組織病理，利用Western blot和實(shí)時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qPCR)法檢測回腸黏膜FXR與TLR4蛋白及其mRNA的表達(dá)。此外，取40只小鼠隨機(jī)均分為OJ、ED、ID和SH四組，各組中再用FXR激動劑GW4064(n=5)灌胃干預(yù)，羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，n=5)作為對照。
　　結(jié)

4、果:小鼠膽道梗阻后，腸黏膜FXR蛋白(0.792±0.034)及其mRNA(0.902±0.072)表達(dá)較SH組（分別為0.407±0.072和0.315±0.081）明顯升高(OJ vs SH，均P＜0.001)。腸粘膜TLR4蛋白(0.294±0.065)及其mRNA(0.097±0.063)表達(dá)較SH組(分別為0.729±0.125和0.546±0.044)明顯下降(OJ vs SH，均P＜0.001)。膽道梗阻解除后，F(xiàn)XR降低

5、，TLR4升高。膽汁外引流術(shù)后，相對于OJ組，F(xiàn)XR蛋白(0.675±0.046)表達(dá)下降而其mRNA(0.972±0.233)表達(dá)升高(ED vs OJ，P=0.001和P=0.519)，TLR4蛋白(0.421±0.050)及其mRNA(0.194±0.022)表達(dá)升高(ED vs OJ，P=0.018和P=0.021)。膽汁內(nèi)引流術(shù)后，F(xiàn)XR蛋白(0.524±0.021)及其mRNA(0.679±0.010)表達(dá)較OJ組明顯下降(

6、ID vs OJ，P＜0.001和P=0.066)，但仍高于SH組(ID vs SH，P=0.002和P=0.008)，效果好于外引流(ID vsED，P＜0.001和P=0.023）。TLR4蛋白(0.524±0.021)及其mRNA(0.397±0.023)表達(dá)較OJ組明顯上升(ID vs OJ，均P＜0.001)，但仍然低于SH組(ID vs SH，P=0.007和P=0.002)，效果好于外引流(ID vs ED，P=0.006