Tbx3對(duì)ES細(xì)胞分化及端粒延長(zhǎng)機(jī)制的初步探討.pdf

1、Tbx3基因是T-box(Tbx)基因家族的成員之一，這一家族屬于發(fā)育調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因家族，早期即在胚胎的肢芽邊緣表達(dá)，參與細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)，從而影響機(jī)體的發(fā)育和穩(wěn)定，尤其在胚胎發(fā)育時(shí)期，對(duì)于四肢和乳腺的發(fā)育尤其重要。Tbx3和Tbx2還在機(jī)體的復(fù)制性衰老及腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮作用。最近Nature一篇報(bào)道說(shuō)在重編程多能干細(xì)胞時(shí)，加入Tbx3轉(zhuǎn)錄因子，可以提高獲得嵌合體的效率，但是具體的機(jī)制并不清楚。推測(cè)可能有兩種機(jī)制：一方面Tbx3通過(guò)

2、提高ES細(xì)胞多能性而實(shí)現(xiàn)，因?yàn)橛袌?bào)道Tbx3可以在沒(méi)有Lif因子存在的情況下，通過(guò)調(diào)控Nanog維持細(xì)胞的多能性，并且也有研究表明Nanog是生殖細(xì)胞形成及存活所必需的，所以可能的模式是Tbx3通過(guò)調(diào)控Nanog調(diào)控生殖系轉(zhuǎn)移：另一方面Tbx3可能通過(guò)影響ES細(xì)胞的分化方向使其更容易向生殖細(xì)胞分化而實(shí)現(xiàn)，因?yàn)門bx3對(duì)早期胚胎發(fā)育具有重要且廣泛的調(diào)控作用，所以設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)在ES細(xì)胞里過(guò)表達(dá)Tbx3，通過(guò)定量和免疫熒光檢測(cè)過(guò)表達(dá)細(xì)胞系的多能性

3、基因的表達(dá)情況，另外通過(guò)體內(nèi)注射和體外分化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證我們的假設(shè)。結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)Tbx3后ES細(xì)胞的多能性基因并沒(méi)有顯著變化，體外EB分化和畸胎瘤注射也能向三胚層分化，但是當(dāng)分化8天時(shí)，意外發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Tbx3細(xì)胞系有極微弱或沒(méi)有心肌跳動(dòng)，并且繼續(xù)分化11天時(shí)也沒(méi)有出現(xiàn)，檢測(cè)心肌marker(MHC，Myocardial，Nkx2.5)發(fā)現(xiàn)也沒(méi)有表達(dá)或表達(dá)很低，這表明Tbx3可以影響ES細(xì)胞向心肌分化。同時(shí)也首次發(fā)現(xiàn)Tbx3可以引起端粒的延長(zhǎng)