2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩122頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥是目前世界上使用最廣泛的殺蟲劑之一,在環(huán)境中的殘留和積累,給人類健康和生態(tài)系統(tǒng)造成了巨大的威脅。生物降解因為其高效、安全、無二次污染,已成為農(nóng)藥殘留修復的有效措施。
  本文首先對一株本實驗室前期篩選到的擬除蟲菊酯高效降解菌株GF31進行了16S rDNA分子進化分析,鑒定其為銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa),并提交中國普通微生物菌種保藏中心保藏(CGMCC7173)。對GF31的菊酯降

2、解酶的定域?qū)嶒灡砻鳎富盍χ饕挥诎?,占總酶活?1.5%,說明其為胞外酶,這與目前普遍報道的胞內(nèi)菊酯降解酶不同。對產(chǎn)酶培養(yǎng)基進行了優(yōu)化,得到最優(yōu)培養(yǎng)基組成為:廢糖蜜5g/L,蛋白胨10g/L,NaH2PO40.12 g/L,苯丙氨酸1.0 g/L。培養(yǎng)到12 h時,再加入0.1%的吐溫80。菌株GF31的產(chǎn)酶量增加約2.6倍,為后續(xù)開展降解酶分離純化和結(jié)構(gòu)性質(zhì)等研究奠定了基礎。
  根據(jù)GF3的菊酯降解酶的基本性質(zhì)設計出一套分

3、離純化方案,經(jīng)過超濾、鹽析、離子交換和凝膠層析四步純化,菊酯降解酶最終純化倍數(shù)為32.8倍,酶活回收率為26.6%,比酶活達到2571.9 U/mg。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳檢測,表明純化酶已達電泳純,分子量約為53 KDa。
  對降解酶進行鑒定和結(jié)構(gòu)表征,測得其質(zhì)譜分子量為51 KDa,結(jié)合SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果,說明該酶是一個單亞基蛋白。測得其N-端氨基酸的順序為:NH2-Thr-Pro-Gly-Lys-Pro-As

4、n-Pro-Ser-Ile-Cys。經(jīng)還原和非還原的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳,結(jié)果表明降解酶分子內(nèi)可能含有二硫鍵;糖基化測定結(jié)果表明降解酶不含或僅含極少量的糖。對純化酶的肽指紋圖譜進行數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果表明其與來源于Pseudomonas aeruginosa M18和PAO1的假定的氨肽酶具有很高的相似性,認為可能為同一種蛋白。
  根據(jù)Pseudomonas aeruginosa PAO1的aminopeptidase基因序列設計

5、引物,通過PCR獲得了銅綠假單胞菌GF31的菊酯降解酶基因APs(在GeneBank中登記號為KT735188),并成功實現(xiàn)APs在大腸桿菌宿主中的異源表達。對菊酯降解酶基因APs進行生物信息學分析,結(jié)果表明該酶由536個氨基酸組成,前24個氨基酸為信號肽,第25-36個氨基酸為前導肽,隨后是500個氨基酸殘基的成熟蛋白,分子量為53.7 KDa,與純化蛋白的分子量相符。蛋白保守域分析和氨基酸序列分析的結(jié)果表明,菊酯降解酶APs屬于鋅-

6、肽酶超家族(M28家族)的氨肽酶,具有氨肽酶典型的催化三元體(Glu341,Ser423和His296)以及與Zn配位的5個氨基酸殘基His296,Asp308,Glu341,Asp369,和His467。這是目前為止第一個報道的具有擬除蟲菊酯降解能力的氨肽酶。對菊酯降解酶APs的一級結(jié)構(gòu)進行了分析,與純化酶的氨基酸組成結(jié)果基本一致,僅Glu、Gly和Pro的含量誤差較大;對其二級結(jié)構(gòu)進行了預測,結(jié)果表明α螺旋含量為32.8%,β折疊含

7、量為20.6%,無規(guī)則卷曲的含量為46.6%;以PDB蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中相同性最高的灰色鏈霉菌屬Streptomyces griseus氨肽酶為模板,利用同源建模法獲得APs三級結(jié)構(gòu)預測圖。
  對菊酯降解酶進行了比較系統(tǒng)的降解特性研究,為該酶的實際工程應用提供理論依據(jù)。該酶的最適降解pH值為7.0,最適降解溫度為60℃;在70℃以內(nèi),pH5.0~9.0范圍內(nèi)均可保持良好的活性,表明該酶具有優(yōu)良的穩(wěn)定性;Ag+、Hg+和Cu2+對該酶

8、有明顯的抑制作用,而其它金屬離子對其活性影響不大。離子螯合劑EDTA和phenanthroline對菊酯降解酶活力沒有抑制作用,說明菊酯降解酶活力不依賴于金屬離子。表面活性劑SDS和Triton X-100能夠明顯抑制菊酯降解酶活力。菊酯降解酶能催化降解氯氰菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯等多種擬除蟲菊酯,其中對氯氰菊酯降解活力最高。反應動力學參數(shù)的測定結(jié)果表明,以氯氰菊酯為底物時,Vmax=0.0017μM/s,Km=47.7μM,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論