天然抗氧化劑EGCG對(duì)節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的小鼠肝毒性的保護(hù)作用及其機(jī)理研究.pdf

1、由于水體富營(yíng)養(yǎng)化的日趨嚴(yán)重，藻類(lèi)水華爆發(fā)越加頻繁。其中有毒藻類(lèi)分泌的次生代謝產(chǎn)物藻毒素由于其強(qiáng)烈的毒性越來(lái)越受到人們的重視。節(jié)球藻毒素(Nodularin; NOD)是一種具有強(qiáng)烈肝毒性的藻類(lèi)生物毒素。為了揭示NOD對(duì)人類(lèi)肝臟的毒效應(yīng)，以模式生物小鼠(ICR)為對(duì)象，研究長(zhǎng)期低劑量NOD(10μg/kg/d; LD50=50μg/kg)誘導(dǎo)下，小鼠體重、肝重、LBI％及肝功能變化情況，并對(duì)肝臟形態(tài)學(xué)、病理學(xué)上的微結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行觀察。結(jié)果表

2、明:(1)在NOD(10μg/kg21d)暴露下，小鼠體重、肝重及LBI％顯著下降;(2)在NOD誘導(dǎo)下，小鼠血液中ALT、AST及LDH顯著上升(63.6％，9.5％，6.8％);(3) NOD21d的暴露可誘導(dǎo)小鼠肝臟出現(xiàn)“草莓狀表面”的肉眼可見(jiàn)的形態(tài)學(xué)改變;(4)通過(guò)H&E染色觀察到NOD可誘導(dǎo)小鼠肝臟出現(xiàn)微小結(jié)節(jié)、細(xì)胞嗜酸性病變、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、慢性淤膽及脂肪病變等病理學(xué)現(xiàn)象。而當(dāng)暴露時(shí)間延長(zhǎng)到28d時(shí)，部分嗜酸性變性肝細(xì)胞繼續(xù)惡

3、化并最終轉(zhuǎn)變?yōu)槭人嵝◇w;(5) TEM觀察下發(fā)現(xiàn)小鼠肝細(xì)胞在NOD的誘導(dǎo)下出現(xiàn)核固縮、染色質(zhì)凝集或邊集、線(xiàn)粒體嵴橫紋加深及分布散亂、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹、核糖體脫粒等現(xiàn)象，并且在胞質(zhì)中多有觀察到徼泡性脂肪變性及吞噬小泡。上述變化充分說(shuō)明:低劑量NOD的長(zhǎng)期暴露可引起小鼠慢性肝中毒，主要原因應(yīng)為肝細(xì)胞嗜酸性病變及炎癥的誘發(fā)，并在暴露時(shí)間延長(zhǎng)后進(jìn)一步惡化，導(dǎo)致肝板結(jié)構(gòu)破壞更加嚴(yán)重，肝臟進(jìn)一步受損。
　　 表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(Epigal

4、locatechin gallate; EGCG)屬于天然抗氧化劑，具有極強(qiáng)的自由基清除能力。使用EGCG作為保護(hù)劑進(jìn)行NOD染毒前的預(yù)處理，再通過(guò)H&E染色、TEM透射觀察、抗氧化指標(biāo)檢測(cè)以及凋亡、炎癥相關(guān)細(xì)胞因子在基因及蛋白水平上的表達(dá)來(lái)評(píng)價(jià)EGCG對(duì)NOD誘導(dǎo)的肝毒性的保護(hù)作用。結(jié)果顯示:(1)高劑量(200mg/kg/d; i.g.)EGCG前處理有效抑制肝臟“草莓狀表面”的形成;(2)高劑量(200mg/kg/d; i.g.)

5、EGCG前處理有效抑制肝細(xì)胞嗜酸性病變、膽汁淤積、點(diǎn)狀壞死、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、脂肪變性、水樣變性等;(3) EGCG前處理有效抑制肝細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、染色質(zhì)凝集邊集、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹、核糖體脫粒、嵴橫紋加深、線(xiàn)粒體腫脹等;(4)與NOD處理組相比，EGCG前處理可有效提高肝細(xì)胞內(nèi)GSH含量(50％)，降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量(73.9％)，并提高CAT(45.8％)及SOD(15.8％)的酶活性，提高胞內(nèi)抗氧化能力;(5)與NOD處理組相比，E

6、GCG預(yù)處理可使得促凋亡因子Bax的表達(dá)量在基因及蛋白層面下調(diào)(74.3％)，抑凋亡因子Bcl-2的表達(dá)量在基因(23.1％;P＜0.01)及蛋白水平上（33.3％;P＜0.01）顯著增加，與此同時(shí)增加胞內(nèi)凋亡敏感性(79.2％;P＜0.01);(6)在NOD的誘導(dǎo)下，肝細(xì)胞內(nèi)TNF-α含量在基因7.8倍;P＜0.01）及蛋白（72.2％;P＜0.01）水平上都呈現(xiàn)出顯著上升的趨勢(shì)，而在EGCG的保護(hù)作用下(200mg/kg)，TNF-