小鼠骨髓來源的祖細(xì)胞亞群分化能力及心梗修復(fù)能力的比較研究.pdf

1、目的：研究小鼠骨髓來源的Sca-1+/CD31+亞群與Sca-1+/CD31-亞群在向心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化能力及其心梗修復(fù)能力的差異。
　　方法：從小鼠骨髓中分離出具有多向分化潛能的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(Bone Mononuclear Cells，BMNCs)，進(jìn)一步通過流式細(xì)胞術(shù)分選出 Sca-1+/CD31+亞群與Sca-1+/CD31-亞群。在添加血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF），成纖維細(xì)胞生長因子（hFGF-B），表皮

2、細(xì)胞生長因子（EGF），胰島素生長因子（R3-IGF-1）和抗壞血酸（Ascorbic acid）的5％FBS/EBM-2中培養(yǎng)14天，進(jìn)而通過免疫熒光染色和RT-PCR檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物vWF，VE-cadherin和CD31的表達(dá)。以此來比較骨髓來源的不同祖細(xì)胞亞群向血管內(nèi)皮細(xì)胞定向分化能力的差異。在添加Wnt通路拮抗劑DKK-1，二甲基亞砜（DMSO），骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP-2），成纖維細(xì)胞生長因子（FGF-4和FGF-8），以

3、及5-氮胞苷（第一至第三天）的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)14天，進(jìn)而通過免疫熒光染色和RT-PCR檢測(cè)心肌細(xì)胞標(biāo)志物Nkx2.5，cTnT和GATA-4等的表達(dá)。從而比較小鼠骨髓來源的不同祖細(xì)胞亞群向心肌定向分化能力的差異。氣管插管開胸行小鼠冠狀動(dòng)脈前降支（LAD）結(jié)扎，建立小鼠心肌梗死的模型。將 Sca-1+/CD31+亞群、Sca-1+/CD31-亞群和單個(gè)核細(xì)胞（MNCs）注射入梗死心肌周圍，7天和28天后分別檢測(cè)心臟超聲并于28天取心臟組

4、織，檢測(cè)細(xì)胞存活、血管再生和心肌纖維化程度。
　　結(jié)果：免疫熒光染色和 RT-PCR的結(jié)果表明，在血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，Sca-1+/CD31+亞群更易于分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞，而 Sca-1+/CD31-亞群增殖緩慢，內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物表達(dá)很低；在心肌細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，Sca-1+/CD31-亞群更易于分化成心肌細(xì)胞，cTnT的陽性表達(dá)率高于 Sca-1+/CD31+亞群和 MNCs。體內(nèi)注射骨髓來源的祖細(xì)胞亞群，心臟彩超提示：7