HIF-1α對BMP2誘導(dǎo)干細胞成軟骨、成骨分化的影響的研究.pdf

1、目的:探討了低氧通路中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)對骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(bonemorphogenetic protein2，BMP2)誘導(dǎo)干細胞成軟骨分化以及成骨分化的影響，闡明HIF-1α在干細胞軟骨、成骨分化中的作用。
　　方法:構(gòu)建及擴增相應(yīng)腺病毒AdBMP2、AdHIF-1α、AdGFP，感染目的干細胞珠C3H10T1/2; RT-PCR驗證目的

2、基因的表達;Westernblot檢測了成軟骨分化、成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox9、Runx2的表達;Real-time PCR法檢測成軟骨、成骨分化標志物COL2A1、aggrecan、COL1A1和ALP的mRNA表達;Alcian blue、ALP(alkalinephosphatase，ALP)及Alizarin red S染色分別檢測軟骨細胞外基質(zhì)、堿性磷酶活性及骨基質(zhì)鈣鹽沉積情況;并且在體外實驗了解HIF-1α對BMP2誘

3、導(dǎo)胎鼠肢芽骨骼發(fā)育過程中的影響;且進行干細胞裸鼠皮下移植，觀察不同處理組所形成骨塊的組織結(jié)構(gòu)情況。
　　結(jié)果:HIF-1α明顯增加了BMP2誘導(dǎo)的Sox9以及下游COL2A1、aggrecan等成軟骨分化相關(guān)基因的表達，抑制了BMP2誘導(dǎo)的Runx2及其下游基因COL1A1、ALP等成骨分化相關(guān)基因的表達;Alcian blue染色結(jié)果顯示HIF-1α促進了軟骨細胞外基質(zhì)的分泌，ALP染色及茜素紅染色提示HIF-1α抑制了ALP的