內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與炎性腸病發(fā)病及小檗堿保護(hù)性調(diào)節(jié)的體外研究.pdf

1、研究背景：炎性腸?。↖BD）近些年來發(fā)病率驟升，究其病因尚不清楚。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，未折疊或錯(cuò)誤折疊的蛋白蓄積可以誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）?，F(xiàn)已知ERS在UC及CD患者中扮演重要角色：
　　 有研究顯示，IBD患者病變腸道中CHOP/GADD153(生長停滯及DNA損傷基因，gene for growth arrest and DNA damage)、GRP78(葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78)表達(dá)上調(diào)。小檗堿（berberine, Ber)是從黃

2、連等植物中提取的異喹啉類生物堿,3000多年前在祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)就被廣泛地應(yīng)用于治療各種感染性疾病。近年來發(fā)現(xiàn)其具有抗菌、抗心律失常及降血脂等多種藥理作用,最近研究發(fā)現(xiàn), Ber通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞內(nèi)ERS從而抑制HIV PI誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答。目前IBD治療成本高，且藥物副作用復(fù)雜，另辟新藥作為補(bǔ)充或是替代治療是非常必要的。然而，供選擇藥物使用的科學(xué)依據(jù)還很欠缺，已知一些傳統(tǒng)中藥具有治療作用，但其分子靶位尚不清楚。本研究旨在研究IBD中，小檗堿對

3、ERS的保護(hù)性調(diào)節(jié)作用。
　　 研究目的：小檗堿能否通過調(diào)節(jié)ERS來治療IBD。
　　 研究方法：Caco-2分組：對照組;TNF-α(50ng/ml)處理24hr組；
　　 IFN-r （2.5ng/ml）處理24hr組；TNF-α(50ng/ml)和IFN-r（2.5ng/ml）協(xié)同處理24hr組。Western blot測ERS標(biāo)志性蛋白GRP78; RT-PCR 檢測xbp-1mRNA剪切水平變化。根據(jù)造

4、模結(jié)果分組：MTT法測小檗堿最佳藥物濃度，以Ber最佳藥物濃度預(yù)處理再以促炎因子孵育為實(shí)驗(yàn)組;同時(shí)設(shè)立對照組。流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞凋亡情況；Western blot測ERS標(biāo)志性蛋白GRP78、凋亡信號分子caspase-3、JNK/p-JNK及ERS特有的凋亡蛋白caspase-12表達(dá)水平變化；RT-PCR 檢測xbp-1mRNA剪切水平變化。
　　 研究結(jié)果：TNF-α(50ng/ml)和IFN-r（2.5ng/ml）協(xié)同處

5、理24hr后GRP78表達(dá)明顯增加，xbp-1mRNA剪切水平也顯著增加，提示很好地誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的存在。MTT及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示, 20μM小檗堿預(yù)處理2hr,能顯著減輕IFN-r/TNF-α引起的細(xì)胞凋亡水平；Western blot顯示促炎因子協(xié)同孵育后GRP78及凋亡信號分子P-JNK、cleaved caspase-3及caspase-12表達(dá)水平顯著增加，小檗堿預(yù)處理則能明顯減輕后者表達(dá)水平；RT-PCR結(jié)果顯示小檗堿預(yù)處