p38MAPK信號(hào)通路在逆灸防治阿爾茨海默病模型大鼠中的作用研究.pdf

1、目的：
　　 阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD),是一種嚴(yán)重危害中老年人身心健康的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性的認(rèn)知功能障礙、學(xué)習(xí)記憶能力減退、情感障礙、行為失常,最終導(dǎo)致生活自理能力喪失。在老年人群中,AD已成為繼腫瘤、心臟病和中風(fēng)之后的第四位死亡原因,給家庭及社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)和痛苦。隨著我國(guó)人口的老齡化,AD的發(fā)病呈現(xiàn)出較快的增長(zhǎng)趨勢(shì),業(yè)已成為嚴(yán)重的公共健康問(wèn)題。由于AD病程較長(zhǎng),病情較重

2、,中晚期AD的治療效果不佳且治療費(fèi)用高,因此研究AD的側(cè)重點(diǎn)應(yīng)轉(zhuǎn)向早期診斷和早期干預(yù)。本課題將聚集態(tài)Aβ25-35立體定向注入大鼠雙側(cè)海馬造成AD模型,通過(guò)逆灸“百會(huì)”“腎俞”、“足三里”進(jìn)行防治,研究p38MAPK信號(hào)通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在逆灸防治AD中的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 健康雄性SD大鼠(15月齡)50只,體重350～480g,先進(jìn)行Y型水迷宮篩選,淘汰反應(yīng)過(guò)于遲鈍或特別敏感的大鼠,將合格大鼠按隨機(jī)數(shù)字表

3、法分為4組,正常組、假手術(shù)組、模型組、逆灸組,每組10只。逆灸組處理方法是對(duì)正常大鼠先施于艾灸刺激。于正常大鼠“百會(huì)”、“腎俞”、“足三里”穴上方2～3cm處懸灸(“腎俞”、“足三里”左右隔日交替使用),每穴持續(xù)5分鐘,每日1次,6日為1療程,療程間休息1日,共3個(gè)療程。施灸結(jié)束當(dāng)日即開(kāi)始給大鼠雙側(cè)海馬區(qū)注射Aβ25-35建立AD模型,造模后次日繼續(xù)艾灸治療1療程。Morris水迷官行為學(xué)試驗(yàn)測(cè)定其學(xué)習(xí)記憶能力,透射電鏡觀察逆灸對(duì)AD模

4、型大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響,免疫組化SP法觀察逆灸對(duì)AD模型大鼠海馬區(qū)磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶(P-p38MAPK)、炎癥介質(zhì)環(huán)氧合酶2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)表達(dá)情況的影響。全部數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī),用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以(-x±s)表示。
　　 結(jié)果：
　　 (1)從Morris水迷宮試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),各組大鼠逃避潛伏期隨著游泳天數(shù)的增加而逐漸縮短,說(shuō)明各組大鼠在

5、5天游泳訓(xùn)練中,對(duì)于尋找平臺(tái)均有一定的學(xué)習(xí)記憶能力,但各組之間學(xué)習(xí)記憶能力有很大差異。Aβ25-35聚集液立體定向注入大鼠雙側(cè)海馬后,模型組大鼠5天平均潛伏期及后3天平均潛伏期均較其他組明顯延長(zhǎng),穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)比其他各組明顯減少。定位航行試驗(yàn)及空間探索試驗(yàn)中,模型組大鼠象限百分比亦明顯比其他各組少,與正常組及假手術(shù)組比較,有極顯著性差異(P＜0.01),說(shuō)明模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力顯著降低,雙側(cè)海馬一次性注射Aβ25-35制備AD模

6、型成功。與模型組比較,逆灸組大鼠5天平均潛伏期和后3天平均潛伏期均明顯縮短,穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)明顯增多,在實(shí)驗(yàn)平臺(tái)象限的游泳距離占總距離百分比明顯增高,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,有極顯著性差異(P＜0.01)。說(shuō)明逆灸是預(yù)防學(xué)習(xí)記憶障礙疾病的有效方法,逆灸對(duì)AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙具有明顯改善作用。
　　 (2)透射電鏡觀察結(jié)果顯示,正常組和假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞胞膜完整,細(xì)胞漿和細(xì)胞器電子密度均勻,線粒體結(jié)構(gòu)清楚,線粒體嵴清

7、晰可見(jiàn),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)排列整齊,未見(jiàn)明顯病變。模型組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元出現(xiàn)程度不等的退行性改變,神經(jīng)元體積縮小,一些固縮神經(jīng)元散在分布于變性腫脹的神經(jīng)元之間,細(xì)胞漿和細(xì)胞器密度增高,細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則,細(xì)胞器結(jié)構(gòu)破壞,顯示不清,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,脂褐素沉積增多,線粒體數(shù)目減少,線粒體腫脹,基質(zhì)清淡、有空泡,甚至見(jiàn)大量線粒體嵴呈畸形樣改變或缺失.逆灸組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞水腫減輕,線粒體、高爾基體、核糖體較模型組明顯增多.細(xì)胞器可見(jiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張

8、,線粒體輕度腫脹.逆灸對(duì)AD模型大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)退變有明顯改善作用。
　　 (3)模型組大鼠海馬區(qū)P-038MAPK、COX-2、PGE2的表達(dá)明顯增加,表現(xiàn)為陽(yáng)性神經(jīng)元平均灰度值明顯下降,與正常組及假手術(shù)組比較,有極顯著性差異(P＜0.01).逆灸組大鼠海馬區(qū)P-p38MAPK、COX-2、PGE2的表達(dá)明顯減少,表現(xiàn)為陽(yáng)性神經(jīng)元平均灰度值明顯上升,與模型組比較,有極顯著性差異(p＜0.01).
　　 結(jié)論：

9、
　　 海馬區(qū)注射Aβ25-35可以激活p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,p38MAPK的激活導(dǎo)致炎癥介質(zhì)COX-2、PGE2的上調(diào),從而誘導(dǎo)AD大鼠腦內(nèi)神經(jīng)元的退行性改變,引起大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。逆灸治療可引起P-p38MAPK、COX-2、PGE2在海馬區(qū)的表達(dá)明顯減少,可抑制注射Aβ導(dǎo)致的大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞損傷變性,促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的修復(fù),逆灸對(duì)AD模型大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)退變有明顯改善作用。逆灸防治AD的作用機(jī)制,可能是通過(guò)抑