IL-27對CIITA和MHC Ⅱ類分子的調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、白介素27(IL-27)是一個IL-12相關的多功能的細胞因子，它在免疫和炎癥發(fā)生的過程中表現(xiàn)出似乎相互矛盾的作用。IL-27包含p28和EBl3兩個亞基，作用于WSX-1亞基(也叫作TCCR)和gp130亞基構(gòu)成的異二聚體受體(IL-27R)傳遞信號。很多類型細胞如T細胞、自然殺傷細胞、B細胞、單核細胞、肥大細胞和中性粒細胞都表達IL-27R。IL-27R與配體的結(jié)合誘導了胞內(nèi)的信號途徑，包括Janus kinases(JAK)和ST

2、AT轉(zhuǎn)錄因子。 本研究主要集中在探討IL-27促炎的機制。首先我們觀察了IL-27對內(nèi)皮細胞的免疫調(diào)控作用。IL-27刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)可快速誘導干擾素調(diào)節(jié)因子1(IFN regulatory factor-1，IRF-1)的表達，并顯著升高CIITA亞型IV的表達。與CIITAIV的表達相一致，MHC II基因的表答也升高。IL-27也能增強MHC I類分子的表達。另外，在IL-27的作用下，β2-m和TAP

3、-1 mRNA的表達水平也升高?；蛐酒治霰砻鱅L-27可以顯著上調(diào)內(nèi)皮細胞很多和免疫調(diào)節(jié)相關的基因，包括趨化因子CXCL9、CXCL10、CX3CL1的表達。這些結(jié)果首次表明IL-27能在內(nèi)皮細胞上調(diào)MHC II類和I類分子的表達，提示IL-27對血管內(nèi)皮的免疫功能有重要的調(diào)控作用。我們進一步觀察IL-27對THP-1單核細胞系的作用。THP-1細胞是研究單核細胞的很好的模型。與在內(nèi)皮細胞相似，IL-27可上調(diào)THP-1細胞CIIT

4、A III和CIITA IV的mRNA表達水平，導致細胞表面MHC II類分子的表達增加，以及HLA-DM和DO的表達水平升高。另外，IL-27可上調(diào)beta-2m、TAP-1和MHCI類分子的表達。進一步的研究表明，IL-27可增強THP-1細胞表面共刺激分子CD80和CD86及粘附分子CD54的表達。這些結(jié)果表明IL-27可促進單核巨噬細胞的抗原提呈功能。為了進一步分析IL-27通過何種信號機制參與調(diào)節(jié)CIITA和MHC II的表達

5、，我們用ERK抑制劑U0126、p38MAPK抑制劑SB203580和P13K抑制劑LX294002來觀察各條信號通路在IL-27誘導CIITA和MHC II表達中的作用。我們的結(jié)果表明p38MAPK和P13K信號通路都為IL-27作用下最優(yōu)化的MHC II的表達所必需，而ERK信號通路對IL-27誘導的MHC II表達有抑制作用。另外，P13K信號通路也為IL-27誘導最優(yōu)化的MHC I表達所必需。這些結(jié)果表明P13K信號通路參與正調(diào)

6、控IL-27介導的效應，而ERK信號通路對IL-27誘導的MHC II類分子的表達有抑制作用。進一步的研究表明，TLR2激動劑Pam3CSK4和TLR4激動劑LPS介導的TLR信號能部分阻斷IL-27誘導得THP-1細胞MHC II的表達。LPS的抑制效應部分通過ERK和p38MAPK信號途徑介導。 研究表明，IL-27對很多實體瘤有很強的抗腫瘤效應。IL-27的抗腫瘤機制主要包括誘導CD4+T細胞、CD8+T細胞和NK細胞的活

7、化。IL-27還能通過誘導IP-10和MIG的表達而抑制腫瘤的血管新生。我們的另外一項研究是構(gòu)建IL-27的表達載體而評估其對小鼠白血病模型的抗腫瘤效應。我們用重疊延伸PCR來擴增信號肽和單鏈IL-27融合基因，然后把這些基因插入許多真核表達載體中，包括pIRES2-EGFP、pcDNA3.1(-)、p3XFLAG-CMV-9和PCAGEN。用免疫沉淀和western blot檢測IL-27表達載體轉(zhuǎn)染的293T細胞上清中IL-27的分

8、泌和表達。我們用液壓基因轉(zhuǎn)移法(hydrodynamic gene transfer，HGT)將IL-27表達載體導入小鼠體內(nèi)后，在小鼠血清中也能檢測到IL-27的表達。我們用能否誘導HUVECsCIITA mRNA的表達來鑒定IL-27的生物學活性?？傊覀兊难芯渴状伪砻鱅L-27能夠誘導單核細胞和內(nèi)皮細胞CIITA和MHC II的表達。IL-27還能上調(diào)MHC I類分子、共刺激分子和粘附分子的表達。另外，IL-27能激活一個重要的