急性胰腺炎腸道菌群的變化以及其與炎癥的關(guān)系.pdf

1、背景：
　　急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是消化系統(tǒng)的常見疾病，臨床上，輕癥急性胰腺炎（mild acute pancreatitis，MAP）患者不伴有器官衰竭和并發(fā)癥，病情程度輕，病死率極低，而重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）患者病程早期易出現(xiàn)器官功能障礙，病死率可達36-50％，若后期出現(xiàn)繼發(fā)感染，則病死率更高。近年來，越來越多的證據(jù)表明，腸道菌群在AP病

2、情進展中發(fā)揮著重要的作用，腸道微生態(tài)的平衡可以通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)和代謝途徑，并形成腸粘膜生物屏障，從而減少細菌過度增殖及腸源性感染的發(fā)生。
　　目的：
　　通過收集AP患者血清、糞便，測定血液中炎癥因子、腸粘膜屏障功能相關(guān)指標(biāo)，并對腸道菌群進行16S rDNA測序分析，明確AP患者腸道菌群的變化，評價腸道菌群的變化在AP患者病情進展中的作用。
　　研究方法：
　　自2015年7月至2015年12月納入符合入組標(biāo)準(zhǔn)的

3、AP患者，收集所有患者入院后的血液，采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immuno sorbent assay， ELISA）測定血液中的炎癥相關(guān)指標(biāo)：腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白細胞介素-18（interleuki n-18，IL-18），以及腸粘膜屏障功能相關(guān)指標(biāo)：二胺氧化酶（diamine oxida

4、se， DAO）。收集患者糞便，提取 DNA，選定16S rDNA V4區(qū)段進行聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）擴增，結(jié)合Illumina Miseq高通量測序平臺測序鑒定腸道菌群組成，表達峰度，最后收集患者臨床資料，進行統(tǒng)計學(xué)分析：1、將AP分為MAP，中度重癥AP（moderately severe acute pancreatitis， MSAP），SAP三組，比較三組之間基本情況、相關(guān)指

5、標(biāo)、腸道菌群的差異；2、根據(jù)是否出現(xiàn)感染性并發(fā)癥將 MSAP、SAP患者分為感染與非感染組，比較兩組之間基本情況、相關(guān)指標(biāo)、腸道菌群的差異；3、將腸道菌群與相關(guān)指標(biāo)進行斯皮爾曼（spearman）相關(guān)因素分析，了解腸道菌群與病情、炎癥反應(yīng)、腸粘膜屏障功能的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.共納入AP患者116例，其中男性、女性各58例，MAP41例，MSAP52例，SAP23例，年齡51.6±14.6歲，平均起病天數(shù)2.8±1.7

6、天，血液及糞便收集時間為起病4.6±2天。
　　2.MAP、MSAP、SAP三組間炎癥相關(guān)指標(biāo)比較：C-反應(yīng)蛋白（c-reactive protein，CRP）水平：MSAP、SAP組高于MAP組（P＜0.05）；IL-1β、TNF-α水平：SAP組高于MSAP、MAP組（P＜0.05），MSAP組高于MAP組（P＜0.05）；降鈣素原（procalcitonin，PCT）、DAO水平：SAP組高于MSAP、MAP組（P＜0.05

7、）；IL-18水平：SAP組高于MAP組（P＜0.05）。
　　3. MAP、MSAP、SAP三組間腸道菌群主要結(jié)果差異：（1）116個樣品共產(chǎn)生847個操作分類單元（operational taxonomic unit，OTU），三組之間腸道菌群物種多樣性無明顯差異（P＞0.05）。（2）門水平：放線菌門數(shù)量，SAP組較MAP組減少（P＜0.05）。（3）綱水平：β-變形菌綱數(shù)量，MSAP組較MAP組增加（P＜0.05）。（4）

8、目水平：伯克氏菌目數(shù)量，MSAP組較MAP組增加（P＜0.05）；雙歧桿菌目數(shù)量，SAP組較MAP組減少（P＜0.05）。（5）科水平：雙歧桿菌科、乳桿菌科數(shù)量，SAP組較MAP組減少（P＜0.05）。（6）屬水平：有益菌雙歧桿菌數(shù)量，SAP組較MAP、MSAP組減少（P＜0.05）；乳酸桿菌數(shù)量，SAP組較MAP組減少（P＜0.05）；Faecalibacterium、Butyricicoccus屬數(shù)量，MSAP組較MAP、SAP組增

9、多（P＜0.05）。（7）種水平：有益菌普拉梭菌、Butyricicoccus pullicaecorum菌數(shù)量，MSAP組較 MAP、SAP組增多（P＜0.05）；羅伊氏乳酸桿菌，SAP、MSAP組較MAP組減少（P＜0.05）。
　　4.感染組與非感染組比較：（1）感染組入院24h急性生理與慢性健康（acute physiology and chronic health evaluation-II，APACHE-II）評分、4

10、8h APACHE-II評分、住院天數(shù)、ICU住院天數(shù)、DAO水平均高于非感染組（P＜0.05）。（2）感染組有益菌丁酸梭菌、Butyricicoccus pullicaecorum菌數(shù)量較非感染組明顯減少（P＜0.001）。
　　5.腸道菌群與相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)分析：條件致病菌糞球菌屬（r=0.351）與IL-1β水平呈正相關(guān)；腸球菌屬（r=0.208）、變形桿菌屬（r=0.300）、假單胞菌屬（r=0.307）與TNF-a水平呈正