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文檔簡介
1、依賴雙鏈RNA(dsRNA)激活的蛋白激酶(PKR)是脊椎動物中由干擾素(Interferon,IFN)介導(dǎo)的抗病毒防御機制的重要組成部分,屬絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶超家族和eIF-2α激酶家族,在哺乳動物細胞中廣泛存在。鯽魚類PKR基因(CaPKR-like)是第一個報道的非哺乳類PKR同源物。 為了解CaPKR-like在非哺乳動物各組織中的表達活性,本文采用已經(jīng)表達的Zα結(jié)構(gòu)域融合多肽(P<,Zα1 Zα2>),經(jīng)過親和層析
2、純化并免疫家兔,制備了CaPKR-likeN-端包含Zα結(jié)構(gòu)域的多克隆抗體。并利用該抗體檢測CaPKR-like在鯽魚與草魚的正常組織和經(jīng)Poly I:C誘導(dǎo)后的組織表達特性。Western blots顯示在未經(jīng)誘導(dǎo)的鯽魚和草魚各個所檢組織(腦、脾、肝、心、肌肉、腎、腸、皮膚)中該基因表達水平非常低,但是經(jīng)Poly I:C免疫誘導(dǎo)一周后,在鯽魚和草魚等8種組織中有較強的PKR-like蛋白產(chǎn)生。其中,在鯽魚中心臟、肝臟、脾臟、腎、肌肉等
3、組織中該基因表達較強,而在腸道和皮膚的表達略弱。在草魚中腦、心臟、肌肉、肝臟、皮膚等組織中該基因表達較強,而在脾臟、腸道、腎等組織中表達略弱。 為了解CaPKR-like在鯽魚細胞中的定位,采用Poly I:C免疫誘導(dǎo)了鯽魚組織,利用免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)對PKR基因在鯽魚組織中的表達進行了分析,結(jié)果顯示PKR基因在經(jīng)Voly I:C誘導(dǎo)一周后的鯽魚細胞比在未經(jīng)誘導(dǎo)的鯽魚細胞中表達明顯。且發(fā)現(xiàn)CaPKR-like主要定位在鯽魚細胞
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