馬蹄蓮、石斛和姜凝集素基因的克隆及分析.pdf

1、凝集素是一類(lèi)含有至少一個(gè)非催化結(jié)構(gòu)域并能可逆結(jié)合到特異單糖或寡糖上的蛋白質(zhì)。為了挖掘更多更有效的抗病、抗蟲(chóng)基因，本文對(duì)植物凝集素基因進(jìn)行研究，以馬蹄蓮、石斛和姜為材料，利用RACE-PCR技術(shù)，成功地從中克隆出了凝集素基因，并對(duì)其功能進(jìn)行了研究，得到如下結(jié)果：1.首次從天南星科植物馬蹄蓮中克隆了馬蹄蓮凝集素基因zaa，并發(fā)現(xiàn)zaa是由一個(gè)多基因家族編碼的。2.克隆了馬蹄蓮凝集素基因的包含啟動(dòng)子區(qū)、終止子區(qū)和全長(zhǎng)基因組序列，并對(duì)其啟動(dòng)子區(qū)

2、基本活性元件和抗病相關(guān)的元件以及其它的元件進(jìn)行了預(yù)測(cè)。啟動(dòng)子區(qū)具有核心啟動(dòng)子，終止子富含A+T序列，形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，具備終止子的特征。3.構(gòu)建了zaa基因的植物表達(dá)載體pCAMBIA1304-zaa并導(dǎo)入到根癌農(nóng)桿菌EHA105中，對(duì)煙草進(jìn)行了轉(zhuǎn)化。4.從蘭科植物鐵皮石斛中克隆了石斛凝集素基因doa1和doa2。5.首次從姜科植物姜中克隆了姜凝集素基因zoa，姜凝集素基因的全長(zhǎng)為768bp，含有一個(gè)510bp的開(kāi)放閱讀框，編碼169個(gè)氨基

3、酸。分析表明，姜凝集素屬于單子葉甘露糖結(jié)合的凝集素，該研究不僅把這一家族凝集素(甘露糖結(jié)合凝集素)延伸到了姜科，而且有助于進(jìn)一步研究凝集素的進(jìn)化關(guān)系。6.分別構(gòu)建了含aha(天南星凝集素)、doa2和zoa基因的原核表達(dá)載體，并成功地實(shí)現(xiàn)了這三個(gè)基因在E.coli中的表達(dá)，并對(duì)其重組的蛋白進(jìn)行了純化。從植物中提取了天然的AHA和ZOA，作為對(duì)照進(jìn)行了凝血活性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明重組AHA和ZOA具有和天然蛋白一樣的凝血活性。抑菌實(shí)驗(yàn)表明，重組