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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:通過(guò)研究6種唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶基因(ST6GALNAC家族)在甲狀腺濾泡狀癌細(xì)胞株及患者標(biāo)本中的差異性表達(dá),分析基于miR-4299為探針靶向調(diào)控ST6GALNAC4在濾泡狀癌侵襲性的功能機(jī)制,從而為甲狀腺濾泡狀癌的診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。
方法:(1)采用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)6種ST6GALNAC家族基因水平的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)其在兩組具有不同侵襲能力的甲狀腺濾泡狀癌細(xì)胞株(FTC-238和FTC-133)與人甲狀腺正常細(xì)胞
2、株(Nthy-ori3-1),以及臨床甲狀腺濾泡狀癌組織和癌旁組織中的表達(dá)差異,篩選出差異表達(dá)3倍以上的唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶基因。
(2)特異性下調(diào)、上調(diào)差異表達(dá)的ST6GALNAC4基因,檢測(cè)其在干擾、過(guò)表達(dá)前后,F(xiàn)TC細(xì)胞株體內(nèi)外侵襲能力的改變。
(3)采用實(shí)時(shí)定量PCR篩選出兩組FTC細(xì)胞以及癌組織和癌旁組織中差異性表達(dá)的miR-4299,通過(guò)構(gòu)建miR-4299的mimics,antagomir,agomir寡核
3、苷酸,分析其對(duì)ST6GALNAC4的表達(dá)調(diào)控。采用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)一步分析miR-4299靶向調(diào)控ST6GALNAC4。
(4)特異性下調(diào)或上調(diào)miR-4299,檢測(cè)在干擾、過(guò)表達(dá)前后FTC細(xì)胞體內(nèi)外侵襲能力改變以及細(xì)胞內(nèi)ST6GALNAC4表達(dá)水平的差異。
結(jié)果:(1) ST6GALNAC家族在兩組人FTC細(xì)胞株及FTC患者標(biāo)本中的表達(dá)具有顯著差異。
(2)特異性下調(diào)FTC-238細(xì)胞中ST6GALNA
4、C4后,該細(xì)胞在體內(nèi)外的侵襲能力減弱(*P<0.05);特異性上調(diào)FTC-133細(xì)胞中ST6GALNAC4后,該細(xì)胞在體內(nèi)外的侵襲能力增強(qiáng)(*P<0.05)。
(3) miR-4299在人FTC細(xì)胞株、FTC患者標(biāo)本中的表達(dá)具有顯著差異;特異性下調(diào)或上調(diào)miR-4299的表達(dá)介導(dǎo)ST6GALNAC4的表達(dá);miR-4299調(diào)控ST6GALNAC4的表達(dá)。
(4)特異性上調(diào)FTC-238細(xì)胞中的miR-4299,該細(xì)胞
5、體內(nèi)外的侵襲能力明顯減弱,細(xì)胞內(nèi)ST6GALNAC4的表達(dá)水平顯著降低;特異性下調(diào)FTC-133細(xì)胞中的miR-4299,該細(xì)胞在體內(nèi)外的侵襲能力明顯減弱,細(xì)胞內(nèi)ST6GALNAC4的表達(dá)水平顯著增加。
結(jié)論:(1) ST6GALNAC家族在人甲狀腺濾泡狀癌細(xì)胞株、臨床甲狀腺濾泡狀癌患者標(biāo)本中的表達(dá)具有顯著差異,這些特征性改變與人甲狀腺濾泡狀癌侵襲能力具有一定的相關(guān)性。
(2) miR-4299可能通過(guò)靶向調(diào)控ST6
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