曲克蘆丁對糖尿病大鼠認知功能障礙及海馬NAD(P)H-醌氧化物還原酶1的影響.pdf

1、目的：糖尿病認知功能障礙為血糖異常引起的學習、記憶、計算等認知能力的損害，其中糖尿病導致的氧化應激與抗氧化應激系統(tǒng)之間的失衡參與了疾病的發(fā)生、發(fā)展過程。酶類抗氧化系統(tǒng)中NAD(P)H：醌氧化物還原酶1(NQO1)為黃素類蛋白酶，亦為保護性還原酶，當機體受到氧化應激刺激時，NQO1表達增多，從而增強機體的抗氧化能力。本實驗重點觀察糖尿病大鼠出現(xiàn)認知功能障礙時海馬中NQO1的變化以及具有抗氧化作用的中藥曲克蘆丁對糖尿病認知功能障礙的影響。<

2、br>　　方法：雄性Sprague Dawley(SD)大鼠70只，體重150-170g，隨機分為正常對照組(NC組，n=10)，糖尿病組(DM組，n=60)，普通飼料適應性喂養(yǎng)1周，禁食12小時后，DM組大鼠腹腔內一次性注射1％鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg，NC組大鼠腹腔內一次性注射等體積檸檬酸緩沖液，72小時尾靜脈取血測定血糖，≥16.7mmol/L為造模成功，后每周測血糖，若<16.7mmol/L則剔除。造模成功后分別于第1

3、周、12周時對NC組、DM組大鼠進行Morris水迷宮測試，第12周水迷宮測試結束后將DM組大鼠隨機分為糖尿病對照組(DC組，n=15)、糖尿病鹽水組(DN組，n=15)、曲克蘆丁干預組(DT組，n=15)、α-硫辛酸干預組(DL組，n=15)，第13周時D1、組大鼠給予腹腔注射曲克蘆丁60mg.kg-1.day-1，DL組大鼠給予腹腔注射僅α-硫辛酸注射液60mg.kg-1.day-1，DN組、NC組各給予等體積生理鹽水，干預6周，第

4、18周時各組行Morris水迷宮測試后，處死大鼠取海馬，應用實時熒光定量-聚合酶鏈反應法(Real-time PCR)及蛋白質免疫印跡法(Western-blot)分別檢測海馬中NQO1mRNA和蛋白的表達水平，同時采用黃嘌呤氧化酶法測定海馬中超氧化物歧化酶(SOD)活力，硫代巴比妥法測定海馬中丙二醛(MDA)含量。
　　所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包處理，應用重復測量方差分析、多元方差分析及完全隨機設計的單因素方差分析

5、統(tǒng)計數(shù)據(jù)，用均數(shù)±標準差表示統(tǒng)計結果，p<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.一般觀察
　　糖尿病組大鼠于造模成功后出現(xiàn)明顯的多尿、多飲、多食、體重下降，隨著實驗的進行，糖尿病大鼠血糖波動于較高水平(>20.0mmol/L)，同時出現(xiàn)毛色枯黃、皮膚變薄、精神萎靡、易激惹現(xiàn)象。干預過程中DT組大鼠一般情況優(yōu)于DL組。正常對照組大鼠生長狀態(tài)及營養(yǎng)情況良好，無上述糖尿病癥狀。
　　2.血糖及體重的變化造模

6、前DM組與NC組相比，大鼠的血糖及體重均無統(tǒng)計學差異(p>0.05)，干預結束時(第18周)，DC組(28.29±2.79)、DN組(29.25±3.18)、DT組(27.77±2.66)、DL組(30.54±3.31)大鼠血糖均明顯高于NC組(7.63±0.77，p<0.01)，但體重均明顯低于NC組大鼠同期體重(p<0.01)。干預結束時，糖尿病組各亞組間(DC、DN、DT、DL)大鼠血糖及體重均無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。

7、>　　3.Morris水迷宮測試結果第1周時Morris水迷宮測試結果顯示：與NC組相比，DM組大鼠逃避潛伏期無統(tǒng)計學差異(p>0.05)，說明兩組大鼠認知功能無差異。
　　第12周干預結束時Morris水迷宮測試結果顯示：與NC組相比，DM組大鼠逃避潛伏期明顯延長(p<0.05)，在相同時間點兩組逃避潛伏期有統(tǒng)計學差異(p<0.05)，證明第12周時糖尿病大鼠出現(xiàn)了認知功能障礙。
　　第18周干預結束后水迷宮測試結果顯示：

8、與NC組相比，DC、DN、DT、DL組大鼠逃避潛伏期均延長(p<0.05)；與DC/DN組相比，DT、DL組大鼠逃避潛伏期均顯著縮短(p<0.05)；DT組與DL組相比，DC組與DN組相比，大鼠逃避潛伏期均無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。
　　4.海馬中NQO1mRNA的表達Real-time PCR顯示：與NC組(1.00±0.00)相比，DC組(0.70±0.04)DN組(0.72±0.08)大鼠海馬中NQO1mRNA表達量明顯

9、減少(p<0.05)；與DC/DN組相比，DT組(1.18±0.09)、DL組(1.13±0.05)大鼠海馬中NQO1mRNA表達量均明顯增加(p<0.05)；DT組與DL組相比，DN組與DC組相比，海馬中NQO1mRNA表達量均無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。
　　5.海馬中NQO1蛋白的表達Western-blot顯示：與NC組(1.00±0.00)相比，DC組(0.44±0.05)、DN組(0.44±0.04)大鼠海馬中NQO

10、1蛋白表達量明顯減少(p<0.01)；與DC/DN組相比，DT組(1.14±0.05)、DL組(1.19±0.05)大鼠海馬中NQO1蛋白表達量明顯增加(p<0.01)；DT組與DL組相比，DN組與DC組相比，大鼠海馬中NQO1蛋白表達量均無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。
　　6.海馬中SOD活力及MDA含量的測定與NC組(SOD：115.98±7.57 MDA：2.74±0.21)相比，DC組(SOD：61.81±3.94 MDA

11、：3.83±0.11)、DN組(SOD：68.24±7.62MDA：3.71±0.20)大鼠海馬中SOD活力明顯降低(p<0.01)，MDA含量明顯增多(p<0.01)；與DC/DN組相比，DT組(SOD：191.99±11.41 MDA：2.53±0.20)、DL組(SOD：200.32±6.17 MDA：2.02±0.23)大鼠海馬中SOD活力均增強(p<0.01)，MDA含量均明顯減少(p<0.01)；DT組與DL組相比，大鼠海馬

12、中SOD活力無統(tǒng)計學差異(p>0.05)，但DT組中MDA含量比DL組增多(p<0.05)；DN組與DC組相比，大鼠SOD活力及MDA含量均無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。
　　結論：
　　1.糖尿病可導致大鼠認知功能障礙，減少海馬中具有抗氧化能力的NQO1的表達，降低SOD活性，增加氧化應激產物MDA的產生。
　　2.α-硫辛酸可改善糖尿病認知功能障礙，增加海馬中NQO1的表達，增強SOD活性，減少MDA的產生。