曲克蘆丁對STZ糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙及Nrf2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：糖尿病腦病亦稱為糖尿病相關(guān)認(rèn)知減退，主要特征為學(xué)習(xí)和記憶功能障礙。新近研究顯示氧化應(yīng)激是糖尿病腦病發(fā)生和發(fā)展的重要影響因素。核因子E2相關(guān)因子2(Nuclear factor E2-related factor2，Nrf2)是調(diào)控細(xì)胞內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激防御體系的核心轉(zhuǎn)錄因子。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase。SOD)和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)是反應(yīng)組織氧化抗氧化平衡的經(jīng)典指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)旨

2、在探討曲克蘆丁對鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙以及海馬中Nrf2表達(dá)、SOD活力和MDA含量的影響。
　　方法：
　　1糖尿病大鼠模型制備：健康雄性SD(Sprague Dawley)大鼠70只(體重150-170g)，隨機(jī)分為正常對照組(NC組n=10)，糖尿病組(DC組n=60)，糖尿病組大鼠空腹過夜后一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg，72h后測尾靜脈隨機(jī)血糖，血

3、糖≥16.7mmol/l為成模標(biāo)準(zhǔn)。成模后第1周和第12周分別行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，第12周水迷宮實(shí)驗(yàn)后將糖尿病組隨機(jī)分為糖尿病對照組(DC組，n=15)，糖尿病鹽水組(DN組，n=15)，糖尿病α-硫辛酸干預(yù)組(DL組，n=15)，糖尿病曲克蘆丁干預(yù)組(DT組n=15)。
　　2干預(yù)：動(dòng)物成模后第13周，DL組腹腔注射α-硫辛酸(60mg/kg體重)、DT組腹腔注射曲克蘆丁(60mg/kg體重)、DN組和NC組腹腔注射等量生

4、理鹽水每日注射1次，歷時(shí)6周。
　　3行為學(xué)檢測：各組大鼠于成模1周、12周和18周時(shí)分別進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，記錄逃避潛伏期。
　　4標(biāo)本制備及觀察指標(biāo)：18周做完水迷宮實(shí)驗(yàn)次日，處死大鼠，迅速取出海馬組織測定SOD活力及MDA含量、提取組織總RNA進(jìn)行Nrf2基因?qū)崟r(shí)熒光定量.聚合酶鏈反應(yīng)法(R-T PCR)檢測mRNA水平以及通過蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測細(xì)胞Nrf2總蛋白及核蛋白的表達(dá)。所得

5、數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，應(yīng)用重復(fù)測量方差分析、多元方差分析及完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示統(tǒng)計(jì)結(jié)果，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1一般指標(biāo)觀察：
　　糖尿病大鼠造模造模成功后即出現(xiàn)多尿、多飲、多食等癥狀，血糖維持在較高水平(>20.0mmol/l)，隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)展，逐漸出現(xiàn)便溏、體重下降、毛色枯黃、反應(yīng)遲鈍等現(xiàn)象。正常對照組大鼠毛色滑亮，體重穩(wěn)定增長。干預(yù)

6、過程中，曲克蘆丁組大鼠一般情況比α-硫辛酸組好。
　　2 Morris水迷宮結(jié)果：
　　第1周時(shí)，與正常組大鼠相比，糖尿病組大鼠逃避潛伏期無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，NC組和DC組認(rèn)知功能無差異。
　　第12周時(shí)，與正常組大鼠相比，糖尿病組大鼠逃避潛伏期延長(p<0.05)，且在相同時(shí)間點(diǎn)兩組逃避潛伏期有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，提示成模后12周，糖尿病大鼠出現(xiàn)糖尿病認(rèn)知功能障礙。
　　第18周時(shí)，糖尿病對照

7、組逃避潛伏期與糖尿病鹽水組相比無顯著差異(P>0.05)。α-硫辛酸干預(yù)組與曲克蘆丁干預(yù)組均比糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)縮短，但仍長于正常對照組(P<0.05)；α-硫辛酸干預(yù)組與曲克蘆丁干預(yù)組間無顯著差異(P>0.05)。
　　3 R-T PCR結(jié)果：
　　糖尿病對照組和糖尿病鹽水組海馬Nrf2mRNA表達(dá)量較正常組降低(P<0.05)；糖尿病對照組與糖尿病鹽水組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，α-硫辛酸干預(yù)組和曲克蘆

8、丁干預(yù)組的Nrf2mRNA表達(dá)量與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增高(P<0.01，P<0.05)；α-硫辛酸干預(yù)組的Nrf2mRNA表達(dá)量高于曲克蘆丁組(P<0.01)。
　　4 Western blot結(jié)果：
　　4.1細(xì)胞Nrf2總蛋白的表達(dá)：糖尿病對照組和糖尿病鹽水組的Nrf2總蛋白表達(dá)量均低于正常對照組(P<0.01)；糖尿病對照組Nrf2總蛋白表達(dá)量和糖尿病鹽水組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；α-硫辛酸干

9、預(yù)組和曲克蘆丁干預(yù)組的Nrf2總蛋白表達(dá)量與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增高(P<0.01)；α-硫辛酸干預(yù)組的Nrf2總蛋白表達(dá)量與曲克蘆丁干預(yù)組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　4.2細(xì)胞Nrf2核蛋白的表達(dá)：糖尿病對照組和糖尿病鹽水組的Nrf2核蛋白表達(dá)量均低于正常對照組(P<0.01)；糖尿病對照組的Nrf2核蛋白表達(dá)量與糖尿病鹽水組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；α-硫辛酸干預(yù)組和曲克蘆丁干預(yù)組的Nrf2核

10、蛋白表達(dá)量與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增高(P<0.01)；α-硫辛酸干預(yù)組的Nrf2核蛋白表達(dá)量高于曲克蘆丁干預(yù)組(P<0.05)。
　　5 SOD和MDA結(jié)果：
　　SOD活力：糖尿病對照組和糖尿病鹽水組SOD活力均弱于正常對照組(P<0.01)；糖尿病鹽水組和糖尿病對照組SOD活力相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；α-硫辛酸干預(yù)組和曲克蘆丁干預(yù)組與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增強(qiáng)(P<0.01)；α-硫辛

11、酸干預(yù)組SOD活力與曲克蘆丁干預(yù)組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　MDA含量：糖尿病對照組和糖尿病鹽水組的MDA含量均高于正常對照組(P<0.01)；糖尿病對照組的MDA含量和糖尿病鹽水組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；α-硫辛酸干預(yù)組和曲克蘆丁干預(yù)組的MDA含量與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增高(P<0.01)；α-硫辛酸干預(yù)組的MDA含量低于曲克蘆丁干預(yù)組(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1 ST