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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:糖尿病是當(dāng)代危害人類健康的三大疾病之一,發(fā)病率逐年上升,其慢性并發(fā)癥遍及全身各重要臟器。糖尿病腦病是指糖尿病引起的認(rèn)知功能障礙,表現(xiàn)為學(xué)習(xí)與記憶障礙,其發(fā)病機(jī)制尚未明確。目前認(rèn)為,氧化應(yīng)激在其中起了重要作用,與糖尿病腦病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)是核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factorE2-related factor2,Nrf2)通路中最重要的抗氧化蛋白酶。超氧化
2、物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)可反映機(jī)體清除氧自由基的能力即抗氧化應(yīng)激水平。丙二醛(malondialdehyde,MDA)可反映機(jī)體自由基含量及脂質(zhì)過氧化程度從而反映氧化應(yīng)激水平。α-硫辛酸(α-Lipoic Acid)是已知天然抗氧化劑中抗氧化作用最強(qiáng)的一種,而研究發(fā)現(xiàn)黃酮類中藥曲克蘆丁(troxerutin)也具有抗氧化、抗炎作用。本研究建立具有認(rèn)知功能障礙的1型糖尿病大鼠模型,以α-硫辛酸為對(duì)照,觀
3、察曲克蘆丁對(duì)糖尿病大鼠認(rèn)知功能、HO-1及SOD、MDA的影響。
方法:
1.STZ糖尿病大鼠模型制備:
健康雄性(Sprague-Dawley,SD)大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ60mg/kg),3天后尾靜脈血糖≥16.7mmol/L者視為造模成功,飼養(yǎng)12周以使糖尿病大鼠出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙。
2.分組:
健康雄性SD大鼠(體重150~170g)70只,隨
4、機(jī)分為正常對(duì)照組(NC,n=10)及糖尿病組(DM,n=60);
糖尿病組又隨機(jī)分為4組:糖尿病對(duì)照組(DC,n=15),糖尿病鹽水組(DN,等體積生理鹽水腹腔注射,n=15),糖尿病α-硫辛酸組(DL,60mg/kgα-硫辛酸腹腔注射,n=15),糖尿病曲克蘆丁組(DT,60mg/kg曲克蘆丁腹腔注射,n=15),干預(yù)6周。
3.一般觀察:觀察并記錄大鼠精神狀態(tài)及進(jìn)食飲水尿量等一般情況,檢測(cè)并記錄血糖、體重變化。<
5、br> 4.行為學(xué)實(shí)驗(yàn):第1、12、18周各組大鼠分別行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),記錄逃避潛伏期(s),分析學(xué)習(xí)記憶能力變化。
5.標(biāo)本制備及觀察指標(biāo):藥物干預(yù)6周后,取大腦海馬組織,用實(shí)時(shí)熒光定量(Real-Time Polymerase Chain Reaction,Real-Time PCR)方法檢測(cè)HO-1mRNA表達(dá)量,蛋白質(zhì)印跡(Western blot)方法檢測(cè)HO-1蛋白含量,黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)海馬SOD含量,
6、硫代巴比妥酸法檢測(cè)海馬MDA含量。
6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-X±S)表示,水迷宮數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量及多元方差分析,Real-TimePCR、Western blot、SOD、MDA結(jié)果采用單因素方差分析(One WayANOVA),均數(shù)間兩兩比較采用Student-Newman-Keuls檢驗(yàn),P<0.05為差異有顯著性。
結(jié)果:
1.一般情況觀察、血糖及
7、體重變化正常組大鼠精神狀況良好,毛皮光澤,反應(yīng)靈敏,攝食量、飲水量及尿量正常,體重顯著增加;糖尿病組大鼠精神狀況差,毛皮污穢無光澤,多尿、多飲、多食,生長(zhǎng)緩慢,明顯消瘦,與正常組相比,體重明顯減輕(P<0.01),血糖明顯升高(P<0.01)。
2.Morris水迷宮逃避潛伏期①成模后第1周:糖尿病組與正常對(duì)照組無顯著差別(P>0.05)。
②成模后第12周即干預(yù)前:糖尿病組較正常對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P<0.01)。
8、r> ?、鄢赡:蟮?8周即干預(yù)結(jié)束:與正常對(duì)照組相比,糖尿病α-硫辛酸組、糖尿病曲克蘆丁組、糖尿病對(duì)照組、糖尿病鹽水組的逃避潛伏期均明顯延長(zhǎng)(P<0.01);與糖尿病對(duì)照組、糖尿病鹽水組相比,糖尿病α-硫辛酸組及糖尿病曲克蘆丁組逃避潛伏期明顯縮短(P<0.01),糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組無顯著差異(P>0.05);糖尿病對(duì)照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。天數(shù)和組別之間不存在交互作用(P>0.05)。
9、 3.Real-Time PCR結(jié)果(HO-1mRNA表達(dá))與正常對(duì)照組(1±0)相比,糖尿病對(duì)照組(0.6705±0.1557)、糖尿病鹽水組(0.6617±0.1122)海馬HO-1mRNA的表達(dá)顯著降低(P<0.05);糖尿病對(duì)照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。
與糖尿病對(duì)照組及鹽水組相比,糖尿病α-硫辛酸組(0.9933±0.1276)與糖尿病曲克蘆丁組(0.9328±0.1823)海馬HO-1mRNA的
10、表達(dá)顯著增高(P<0.05),達(dá)正常對(duì)照組水平(P>0.05);糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無明顯差別(P>0.05)。
4.Western blot結(jié)果(HO-1蛋白水平)與正常對(duì)照組(1±0)相比,糖尿病對(duì)照組(0.8967±0.0257)、糖尿病鹽水組(0.8544±0.0296)海馬HO-1蛋白水平顯著降低(P<0.05);糖尿病對(duì)照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。
與糖尿病對(duì)照組及鹽
11、水組相比,糖尿病α-硫辛酸組(1.0539±0.0300)與糖尿病曲克蘆丁組(1.0390±0.0300)海馬HO-1蛋白水平顯著增高(P<0.05),達(dá)正常對(duì)照組水平(P>0.05);糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無明顯差別(P>0.05)。
5.海馬SOD、MDA量①SOD活力:
與正常對(duì)照組(115.98±7.57)相比,糖尿病對(duì)照組(61.81±3.94)、糖尿病鹽水組(68.24±7.62)海馬SO
12、D活力明顯降低(P<0.05);糖尿病對(duì)照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。
與糖尿病對(duì)照組及糖尿病鹽水組相比,糖尿病α-硫辛酸組(200.32±6.17)與糖尿病曲克蘆丁組(191.99±11.41)海馬SOD活力明顯升高(P<0.05),并且高于正常對(duì)照組(P<0.05);糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無顯著差異(P>0.05)。
?、贛DA含量:與正常對(duì)照組(2.74±0.21)相比,糖尿病對(duì)
13、照組(3.83±0.11)、糖尿病鹽水組(3.71±0.20)海馬MDA含量明顯升高(P<0.05);糖尿病對(duì)照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。
與糖尿病對(duì)照組及糖尿病鹽水組相比,糖尿病α-硫辛酸組(2.02±0.23)與糖尿病曲克蘆丁組(2.54±0.20)海馬MDA含量明顯降低(P<0.05);糖尿病曲克蘆丁組與正常對(duì)照組間無顯著性差別(P>0.05),糖尿病α-硫辛酸組海馬MDA含量最低,顯著低于曲克蘆丁組
14、及正常對(duì)照組(P<0.05)。
結(jié)論:
1.糖尿病可引起大鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降,STZ糖尿病大鼠12周時(shí)已出現(xiàn)明顯認(rèn)知障礙;
2.STZ糖尿病大鼠海馬組織HO-1mRNA表達(dá)降低,HO-1蛋白含量降低,說明糖尿病大鼠海馬存在抗氧化障礙,加重氧化應(yīng)激損害;
3.曲克蘆丁可改善STZ糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙,效果與α-硫辛酸相當(dāng);
4.曲克蘆丁能夠上調(diào)STZ糖尿病大鼠海馬HO-1mRNA表達(dá)及H
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