
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1、利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)將質(zhì)粒pUC19/rhIFNα-2b上的化學(xué)合成人干擾素α-2b(rhIFNα-2b)基因cDNA擴增并重組至載體pBV220上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pBV220/rhIFNα-2b,之后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α。經(jīng)篩選,檢測,測序正確后通過溫度誘導(dǎo)表達(dá)重組人干擾素α-2b,通過SDS-PAGE電泳觀察到了特異帶,經(jīng)AlphaImagerV5.1軟件分析化學(xué)合成人干擾素α-2b基因表達(dá)量最大時表達(dá)的人干擾素α-2b可占到菌體總蛋白
2、的36%。WesternBlotting檢測可見與IFNα抗體特異性結(jié)合的條帶,并且化學(xué)合成的人干擾素α-2b基因的表達(dá)量是天然人干擾素α-2b基因的表達(dá)量的約123.5倍。通過設(shè)計實驗對不同的表達(dá)溫度條件及使用不同的培養(yǎng)基對人干擾素α-2b蛋白表達(dá)的影響作了比較。研究不同的表達(dá)溫度對人干擾素α-2b蛋白表達(dá)的影響時發(fā)現(xiàn)利用LB培養(yǎng)基培養(yǎng),菌體在35℃培養(yǎng)到OD_(600)約0.4時轉(zhuǎn)移到30℃培養(yǎng)50min后立即升溫到42℃誘導(dǎo)表達(dá),
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