按大腸桿菌偏愛(ài)密碼子化學(xué)合成人干擾素α-2b 基因在大腸桿菌中高效表達(dá)的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)將質(zhì)粒pUC19/rhIFNα-2b上的化學(xué)合成人干擾素α-2b(rhIFNα-2b)基因cDNA擴(kuò)增并重組至載體pBV220上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pBV220/rhIFNα-2b,之后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α。經(jīng)篩選,檢測(cè),測(cè)序正確后通過(guò)溫度誘導(dǎo)表達(dá)重組人干擾素α-2b,通過(guò)SDS-PAGE電泳觀察到了特異帶,經(jīng)AlphaImagerV5.1軟件分析化學(xué)合成人干擾素α-2b基因表達(dá)量最大時(shí)表達(dá)的人干擾素α-2b可占到菌體總蛋白

2、的36％。WesternBlotting檢測(cè)可見(jiàn)與IFNα抗體特異性結(jié)合的條帶,并且化學(xué)合成的人干擾素α-2b基因的表達(dá)量是天然人干擾素α-2b基因的表達(dá)量的約123.5倍。通過(guò)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)不同的表達(dá)溫度條件及使用不同的培養(yǎng)基對(duì)人干擾素α-2b蛋白表達(dá)的影響作了比較。研究不同的表達(dá)溫度對(duì)人干擾素α-2b蛋白表達(dá)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)利用LB培養(yǎng)基培養(yǎng),菌體在35℃培養(yǎng)到OD_(600)約0.4時(shí)轉(zhuǎn)移到30℃培養(yǎng)50min后立即升溫到42℃誘導(dǎo)表達(dá),

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