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1、根據(jù)P.aureofaciens 30-84的phzF 基因及P.fluorescens2-79的phzC基因最為保守的區(qū)域設(shè)計(jì)引物,以該P(yáng)CR產(chǎn)物為探針篩庫(kù),選出陽(yáng)性克隆后排酶譜、Southern雜交確定大片段進(jìn)行shot-gun測(cè)序.結(jié)果表明送測(cè)DNA大片段含有8個(gè)完整的開放閱讀框架命名為phzX1234567,其推測(cè)氨基酸序列與P.aeruginosa PAO1的吩嗪生物合成基因簇推測(cè)氨基酸序列完全一致,這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了先前有
2、關(guān)PCA生物合成基因簇的報(bào)道,即在假單胞菌屬中吩嗪合成的核心基因簇是相當(dāng)?shù)谋J氐?酶譜和雜交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在M18菌株中存在有兩個(gè)拷貝的吩嗪生物合成基因簇.根據(jù)突變實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)這兩個(gè)拷貝在表達(dá)程度上存在差異.引物根據(jù)P. fluorescens Pf5的pltC 基因設(shè)計(jì),之后所用方法與上段采用方法完全相同.送測(cè)DNA大片斷包含有11個(gè)完整的開放閱讀框架,命名為pltYX12345678Z,其推測(cè)氨基酸序列與P.fluorescens Pf-
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