基于活性指數(shù)和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的桂枝加芍藥湯抗炎活性成分快速發(fā)現(xiàn)研究.pdf

1、中藥方劑活性成分發(fā)現(xiàn)是中藥現(xiàn)代化研究的重要內(nèi)容。目前，中藥活性成分發(fā)現(xiàn)的主要方法有系統(tǒng)分離法、活性導向法、生物色譜法等，前兩種方法研究周期長、耗時耗力、命中率低，生物色譜法可以從混合物中快速發(fā)現(xiàn)含量較高的潛在活性成分，但可能會忽略某些微量活性成分。為克服以上研究方法的不足之處，本論文通過采用活性指數(shù)方法評價中藥及其組分中各成分對其活性的貢獻，從而預測其中潛在活性成分，并將該研究思路用于仲景方桂枝加芍藥湯中抗炎活性成分的快速發(fā)現(xiàn)。

2、　　桂枝加芍藥湯出自于《傷寒論》，由桂枝、白芍、生姜、大棗和甘草組成，具有溫脾和中，緩急止痛的功效。臨床上主要用于治療腹?jié)M引起的脹痛，還可以治療頑固性菌痢，十二指腸球部潰瘍，結(jié)核性腹膜炎等疾病。目前該方的藥效物質(zhì)基礎尚不清楚。本論文以桂枝加芍藥湯為研究對象，以方劑中抗炎活性成分的快速發(fā)現(xiàn)為研究目標，具體研究如下:
　　采用液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜(LC-Q-TOF-MS)和液相色譜-離子阱質(zhì)譜(LC-IT-MS)聯(lián)用方法對桂枝

3、加芍藥湯總提物中化學成分進行了分析。共檢測到72個化合物，鑒定和推測了其中54個化合物結(jié)構(gòu)，主要類型包括單萜苷類、三萜皂苷類、黃酮及其苷類和有機酸及其苷類。
　　采用大孔樹脂和制備液相色譜方法將桂枝加芍藥湯總提物分段制備成64個組分。利用LC-IT-MS對各個組分的化學成分進行表征，一共檢測到903個化合物。采用細菌脂多糖(LPS)誘導小鼠巨噬細胞RAW264.7炎癥模型，對桂枝加芍湯湯組分的抗炎活性進行評價。最后整合組分的化學信

4、息和藥理信息，計算各成分的活性指數(shù)，發(fā)現(xiàn)61個化合物有較高的活性指數(shù)值，推測這些化合物可能是潛在的抗炎活性成分。
　　為了驗證預測結(jié)果，對其中8個化合物進行了LC-MS導向的半制備液相色譜分離制備，采用NMR譜鑒定其結(jié)構(gòu)，利用LPS誘導小鼠巨噬細胞RAW264.7的炎癥模型進行抗炎活性驗證。研究發(fā)現(xiàn)，8個化合物均有良好的抗炎活性，其中6個化合物的抗炎活性明顯強于陽性藥吲哚美辛。此外，3個化合物的抗炎活性為首次報道。本研究結(jié)果表明活