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文檔簡介
1、目的：探討在機械應(yīng)力誘導軟骨細胞凋亡的過程中，細胞內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress,ERS）表達情況及兩者在此作用過程中的相互作用關(guān)系
方法：分離培養(yǎng)人膝關(guān)節(jié)軟骨細胞，用應(yīng)力加載系統(tǒng)分別將培養(yǎng)的細胞加載0h,6h,12h,24h和48h，分別在各受力組中加入抗氧化劑N－乙酰半胱氨酸（NAC）和半胱氨酸蛋白酶12（caspas
2、e12）特異性抑制劑Z-ATAD-FMK作為抑制劑組，應(yīng)用RT-PCR檢測各組細胞中凋亡相關(guān)基因 Bcl-2、Bcl-2相關(guān) x蛋白(Bcl, associatedX protein，Bax)及caspase12 mRNA表達量；western blot檢測各組細胞中Caspase-12蛋白表達量;DCFH-DA法檢測細胞中ROS的含量；流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率。
結(jié)果：RT-PCR檢測6 h受力組Bax和caspase-12
3、相對表達量增加，24 h達峰值，48 h有所回降，而Bcl-2相對表達量6 h后開始下降，12 h降到最低，24 h開始回升；ROS含量結(jié)果檢測6h受力組表達量增加，24h達到峰值，48h有所回落；NAC抑制劑組 ROS、Bax、caspase-12表達量均下降，Bcl-2升高。Z-ATAD-FMK抑制劑組caspase-12表達量下降，而ROS表達量不變，Western-Blot檢測caspase-12蛋白表達與相應(yīng)基因表達趨勢相一致
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