CYP1A1和GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化與抗結(jié)核藥物性肝損傷的關(guān)系研究.pdf

1、目的：通過對結(jié)核病患者血漿細(xì)胞色素P450（CYP）1A1和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）P1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化分析，探討CYP1A1和GSTP1基因甲基化狀態(tài)改變與抗結(jié)核藥物所致肝損傷（anti-tuberculosis drug-induced hepatic injury，ADIH）的關(guān)系，同時(shí)也為ADIH的早期發(fā)現(xiàn)及優(yōu)化治療方案提供依據(jù)。
　　方法：1、研究對象：采用1:1配比病例對照研究，嚴(yán)格按照病例與對照的納入及

2、排除標(biāo)準(zhǔn)，選擇127例經(jīng)抗結(jié)核治療6個(gè)月內(nèi)發(fā)生肝損傷的患者為病例組，127例未發(fā)生肝損傷的患者為對照組。2、現(xiàn)場調(diào)查：查閱病歷獲取研究對象的性別、年齡、文化程度及職業(yè)等一般情況；煙酒嗜好；結(jié)核病嚴(yán)重程度、既往病史及服藥史；抗結(jié)核化療方案及用藥前后肝功能檢查等情況。同時(shí)收集患者血液標(biāo)本于-80℃儲存?zhèn)溆谩?、實(shí)驗(yàn)室檢測：采用鹽析法提取外周血細(xì)胞基因組DNA，聚合酶鏈反應(yīng)片段長度多態(tài)性（RFLP-PCR）法檢測多態(tài)性；采用血漿游離DNA提取

3、試劑盒提取血漿游離 DNA，游離 DNA經(jīng)甲基化修飾試劑盒修飾后采用甲基化特異PCR（MSP）法檢測CYP1A1和GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化水平。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：研究對象一般危險(xiǎn)因素、CYP1A1和GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)與ADIH的關(guān)系、ADIH影響因素的多因素分析、CYP1A1和GSTP1基因甲基化交互作用的分析均采用條件Logistic回歸分析，計(jì)算OR值及其95％CI。以上統(tǒng)計(jì)分析均雙側(cè)檢驗(yàn)，規(guī)定檢驗(yàn)水

4、準(zhǔn)α＝0.05。
　　結(jié)果：1、一般危險(xiǎn)因素的分析：病例組和對照組中婚姻、文化程度、職業(yè)、BMI、吸煙、飲酒、結(jié)核病類型等因素的分析結(jié)果顯示，飲酒可能為ADIH發(fā)生的危險(xiǎn)因素，其他因素在兩組分布的差異未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、CYP1A1和GSTP1甲基化與ADIH的關(guān)系：研究結(jié)果顯示病例組中CYP1A1和GSTP1基因甲基化頻率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。為排除兩基因位點(diǎn)多態(tài)性的影響，對病例組CYP1A1 Msp

5、Ⅰ和GSTP1 Ile105Val位點(diǎn)多態(tài)性與甲基化的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)兩者之間存在關(guān)聯(lián)，故本研究可排除該基因位點(diǎn)多態(tài)性對甲基化的影響。最后采用多因素條件Logistic回歸分析調(diào)整了飲酒、CYP1A1和GSTP1基因多態(tài)性因素的影響，發(fā)現(xiàn)CYP1A1和GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島高甲基化仍是ADIH發(fā)生的危險(xiǎn)因素（OR＝1.962，2.660）。3、CYP1A1和GSTP1基因甲基化交互作用分析：對CYP1A1和GSTP1基

6、因各甲基化型別之間是否存在交互作用進(jìn)行了分析，研究結(jié)果顯示CYP1A1和GSTP1基因均發(fā)生甲基化及CYP1A1或GSTP1單一基因甲基化，與均未甲基化相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示CYP1A1和GSTP1基因甲基化之間存在協(xié)同作用，可作為診斷及治療ADIH的潛在指標(biāo)。
　　結(jié)論：1、CYP1A1和GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化與ADIH的發(fā)生有關(guān)，具有高甲基化特征的患者是發(fā)生ADIH的高危人群。2、CYP