雞爪槭葉花色素苷合成關(guān)鍵基因的克隆及序列分析.pdf

1、雞爪槭(Acerpalmatum‘Bloodgood’)是槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer)的多年生木本植物,具有豐富多彩的獨特葉色,是一種重要的觀葉植物,在園林綠化中廣泛應(yīng)用,備受關(guān)注。目前人們對血紅雞爪槭葉色形成的分子機(jī)理的研究相當(dāng)缺乏,未見其葉色形成相關(guān)基因的克隆和序列分析的相關(guān)報道。這極大的限制了以血紅雞爪槭為代表的彩葉植物的分子育種和葉色基因工程的開展?；ㄉ剀諏Σ嗜~植物葉色多彩的形成起主要作用,本研究從血紅雞爪槭

2、葉片中克隆了花色素苷生物合成的幾個關(guān)鍵基因,并對基因序列進(jìn)行分析,以便探討對血紅雞爪槭葉片花色素苷生物合成途徑的分子調(diào)控機(jī)理,主要結(jié)果如下:
　　 1.采用柱式植物RN.Aout法、TRIZOL法和改良CTAB法三種提取方法對紅楓葉片總RNA提取效果進(jìn)行比較分析,以獲得高質(zhì)量的雞爪槭葉片總RNA,結(jié)果表明:改良CTAB法更適于雞爪槭葉片總RNA提取。
　　 2.采用RT-PCR和RACE-PCR的方法,成功獲得了調(diào)控花色

3、素苷表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子WD40基因,該基因全長1104bp,編碼337個氨基酸,氨基酸C端含有4個WD重復(fù)基序。在NCBI中BLAST,發(fā)現(xiàn)獲得的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列與其他物種的結(jié)構(gòu)基因有較高的同源性,并且推斷該基因為血紅雞爪槭的WD40轉(zhuǎn)錄因子。該基因已在Genbank中注冊,注冊號為JQ796698。
　　 3.采用RT-PCR方法,成功分離到CHS基因,該基因全長1466bp,編碼438個氨基酸,NCBI中BLAST發(fā)

4、現(xiàn),所獲得的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列與其他物種的結(jié)構(gòu)基因CHS有較高的同源性,并且與毛果槭有相同的必須活性位點,推斷該基因為血紅雞爪槭的CHS結(jié)構(gòu)基因。該基因已在Genbank上注冊,注冊號為JQ796699。
　　 4.以基因組DNA為模版,克隆了F3H基因,該基因長度為2237bp,含有2個內(nèi)含子,編碼285個氨基酸,并且包含五個2-ODD蛋白的保守基序。NCBI中進(jìn)行BLAST,所獲得的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列與其