動物源性修復材料的病毒滅活與免疫原的觀察.pdf

1、研究目的：通過查閱文獻資料了解動物源性修復材料技術研究進展與行業(yè)前景。參照國家注冊法規(guī)、國際標準、國家標準以及行業(yè)標準等相關要開展動物源性軟組織修復材料和硬組織修復材料病毒滅活工藝效果和免疫安全性研究，為產(chǎn)品臨床推廣應用提供基礎依據(jù)。
　　研究方法：本課題為了驗證2M NaOH30min病毒滅活工藝的有效性，選取了PRV、VSV、PPV和EMCV四種指示病毒用于生物骨材料病毒滅活效果評價；選取了BVDV、IBRV和CPV三種指示病

2、毒用于生物膜材料病毒滅活效果評價。攜帶病毒的生物骨材料經(jīng)過2M NaOH溶液浸泡，分別于0 min、5 min、10 min、15 min、30 min取樣，進行產(chǎn)品滴度檢測和敏感細胞培養(yǎng)檢測，確定各時間點病毒滅活效果。攜帶病毒的生物膜材料則經(jīng)過2M NaOH溶液浸泡，于30min取樣，進行產(chǎn)品滴度檢測。根據(jù)產(chǎn)品注冊要求，本課題動物源修復材料病毒滅活效果以病毒滴度下降4個Log以上作為最終評價指標。
　　本課題通過機體血清中IgG

3、、IgM和補體C3表達量的變化情況，評價動物源性生物膜材料和生物骨材料的免疫安全性。生物骨材料選擇兔橈骨骨缺損植入途徑，分別在2周、4周、12周和24周進行血清中IgG、IgM和補體C3含量檢測，了解生物骨植入機體后引起的體液免疫應答效果。生物膜材料選擇SD大鼠皮下植入途徑，分別在2周、4周和6周進行血清中IgG含量檢測，了解生物膜植入機體后引起的體液免疫應答效果。
　　研究成果：生物骨材料經(jīng)過病毒滅活處理后均無可以檢測到的PRV

4、、VSV、PPV、EMCV，證實可分別使PRV、VSV、PPV、EMCV的滴度均下降4個Log以上。對于未能檢測到病毒滴度的樣品，在敏感細胞上盲傳3代，未能觀察到細胞病變。生物膜材料經(jīng)過病毒滅活處理后，也可使能BVDV、IBRV和CPV三種指示病毒的病毒含量降低4個Log以上。氫氧化鈉處理工藝的病毒滅活效果顯著，避免了動物源修復材料病毒傳播，規(guī)避了人畜共患病等風險，本項目研究的牛源生物骨和生物膜動物源修復材料病毒滅活完全。
　　生

5、物骨材料免疫原安全性研究中，柱形生物骨組和顆粒形生物骨組的補體C3、IgG、IgM含量較正常對照組和假手術對照組水平增高，尤以骨折后兩周明顯，表明兩周左右機體對于植骨材料有明顯排異反應。后期各試驗組血清中補體 C3、IgG、IgM含量均下降，生物骨植入組與假手術組無顯著性差異。
　　生物膜免疫原安全性研究中，各處理組血清中IgG濃度與空白對照組相比均具有顯著統(tǒng)計學差別，生物膜材料植入實驗組與假手術對照組血清IgG濃度沒有顯著性統(tǒng)計