NSCLC的WZB117耐藥株建立及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的:肺癌的主要特征是肺組織中出現(xiàn)不受控制的細(xì)胞生長(zhǎng)，可以轉(zhuǎn)移到附近的組織或擴(kuò)散到肺以外的區(qū)域。在肺癌治療中抗腫瘤藥物的廣泛使用，使得癌細(xì)胞出現(xiàn)對(duì)藥物抵抗的能力。個(gè)體在對(duì)藥物的敏感程度上不同，具有適應(yīng)性的癌細(xì)胞能在藥物治療中存活下來，表現(xiàn)出更強(qiáng)的耐藥性。一些抗腫瘤藥物的原理是通過結(jié)合特殊蛋白或分子來抑制癌癥細(xì)胞發(fā)展，最后使其自行衰亡?？鼓[瘤藥物的特定靶點(diǎn)只特異性結(jié)合一種癌細(xì)胞的特定蛋白或者分子，所以藥物只能抑制癌細(xì)胞的一條通路。在耐藥性

2、沒產(chǎn)生之前，癌細(xì)胞的某一通路持續(xù)受到抑制，患者的病情得以控制。這是很多癌癥患者在未出現(xiàn)耐藥性的時(shí)候服用單靶點(diǎn)治療藥物，治療效果非常顯著的主要原因。在某一通路受到抑制的同時(shí)，癌細(xì)胞選擇其他通路促進(jìn)自身的生長(zhǎng)。最終，抗腫瘤藥物將徹底失去治療效果，藥物難以抑制癌細(xì)胞的發(fā)展，產(chǎn)生了耐藥性。
　　WZB117是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1的抑制劑，一種新型的抗腫瘤藥物。已有研究表明，WZB117對(duì)肺癌和乳腺癌有治療效果。WZB117可以減少細(xì)胞運(yùn)輸葡萄

3、糖，從而降低癌細(xì)胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1、細(xì)胞內(nèi)ATP以及糖酵解酶水平，導(dǎo)致癌細(xì)胞周期阻滯、衰老和壞死。
　　本研究目的明確，在人非小細(xì)胞肺癌中成功構(gòu)建WZB117耐藥株，并以此為基礎(chǔ)探究耐藥機(jī)制。
　　方法:1.經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)和誘導(dǎo)耐藥成功構(gòu)建人非小細(xì)胞肺癌WZB117耐藥株(H1299/WZB117)。2.顯微鏡下觀察H1299和H1299/WZB117的細(xì)胞形態(tài)。3.進(jìn)行平板克隆和CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)WZB117對(duì)H1299和H1

4、299/WZB117增殖和生存能力的影響。4.利用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)WZB117對(duì)H1299和H1299/WZB117遷移能力的變化。5.通過流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)WZB117對(duì)H1299和H1299/WZB117凋亡的影響。6.提取H1299和H1299/WZB117的RNA進(jìn)行RNA-Seq測(cè)序，對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行GO分析。7.根據(jù)GO分析結(jié)果，提出耐藥機(jī)制的假設(shè)，設(shè)計(jì)引物通過PCR驗(yàn)證。
　　結(jié)果:1.成功構(gòu)建H1299/WZB1

5、17。2.顯微鏡下觀察，與H1299相比H1299/WZB117細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，異型性增加，觸角伸出，細(xì)胞更加狹長(zhǎng)。3.WZB117明顯抑制H1299的克隆形成能力和細(xì)胞活力，對(duì)H1299/WZB117的抑制作用較小。4.WZB117明顯抑制H1299的遷移，對(duì)H1299/WZB117的抑制作用較小。5.WZB117誘導(dǎo)H1299發(fā)生細(xì)胞凋亡，對(duì)H1299/WZB117的誘導(dǎo)作用較小。6.H1299/WZB117對(duì)WZB117抵抗可能

6、基因的剪接、上調(diào)和下降有關(guān)。H1299/WZB117的耐藥發(fā)生可能與NUMA1的長(zhǎng)短剪接本含量變化有關(guān)。H1299/WZB117中NUMA1發(fā)生了剪接本含量的變化，SCD和FAM198B含量上升，ID3和ICAM1含量減少。
　　結(jié)論:本研究成功構(gòu)建了H1299/WZB117，細(xì)胞表型實(shí)驗(yàn)證明WZB117可以明顯抑制H1299的增殖、遷移和誘導(dǎo)凋亡，并且對(duì)H1299/WZB117的效果并不顯著。同時(shí)對(duì)耐藥機(jī)制進(jìn)行了初步探討，為解決