鎮(zhèn)江地區(qū)多重耐藥鮑曼不動桿菌分離株耐藥的分子機制研究.pdf

1、目的:
　　為了了解臨床分離的鮑曼不動桿菌的臨床分布以及對臨床常用抗菌藥物的耐藥性;探討多重耐藥鮑曼不動桿菌的耐藥機制，包括各種酶的降解（β-內(nèi)酰胺酶和氨基糖苷類修飾酶等），膜蛋白的突變及外排泵機制等在鮑曼不動桿菌抗菌藥物耐藥中的作用，本文以鎮(zhèn)江地區(qū)鮑曼不動桿菌臨床菌株為研究對象，就上述諸方面對鮑曼不動桿菌多重耐藥的機制進行了研究，以為臨床用藥提供借鑒，為多重耐藥鮑曼不動桿菌流行的控制提供參考。
　　方法:
　　1.采

2、用紙片擴散法(Kirby-Bauer disc diffusion)檢測臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌對12種常用抗菌藥物的敏感性。
　　2.通過PCR檢測β-內(nèi)酰胺類基因(TEM、ADC、OXA-23、OXA-51)和氨基糖苷類修飾酶基因(aac(3)-I、aac(6')-Ib、aph(3')-I、16S rRNA甲基化酶基因armA）;對PCR擴增的膜蛋白CarO和巢式PCR(nested-PCR)擴增的OprD進行測序。

3、r>　　3.軟件Chromas用于讀序各基因序列，軟件DNAMAN連接OprD，擴增后的CarO和OprD翻譯成氨基酸后Blast比對分析，并將OprD的序列在線遞交給Swiss-model建立三維立體結(jié)構(gòu)同源建模。
　　4.通過PCR和qRT-PCR檢測多重耐藥鮑曼不動桿菌和敏感鮑曼不動桿菌的外排泵基因adeB的相對表達，同時擴增adeABC系統(tǒng)的調(diào)控基因adeR、adeS全長片段，測序。
　　結(jié)果:
　　1.鮑曼不

4、動桿菌的藥物敏感性實驗結(jié)果顯示，對所用12種抗菌藥物的敏感性較低，耐藥性較高，有些耐藥率甚至高達100％。
　　2.實驗菌株的β-內(nèi)酰胺類基因和氨基糖苷類修飾酶基因的陽性率很高，其中β-內(nèi)酰胺類基因TEM、ADC、OXA-23和OXA-51的陽性率分別為91.5％、93.6％、93.6％和95.7％，氨基糖苷類修飾酶基因aac(3)-I、aac(6')-Ib、aph(3')-I和16S rRNA甲基化酶基因armA的陽性率分別為7

5、2.2％、72.2％、80.6％和80.6％。
　　3.多重耐藥鮑曼不動桿菌的膜孔蛋白CarO和OprD與SDF株相比均存在相同的突變位點，將OprD的序列遞交Swiss-model同源建模，借助于分子可視化工具軟件Swiss-PdbViewer3.7，可直觀地觀察到由于氨基酸突變導(dǎo)致的三維立體結(jié)構(gòu)的變化。
　　4.耐藥菌株外排泵基因的adeB mRNA表達水平明顯高于敏感株，且耐藥菌株的adeR的2639位堿基發(fā)生A→G突

6、變，其對應(yīng)的219位氨基酸相應(yīng)表現(xiàn)為AAA（賴氨酸）→GAA（谷氨酸）改變，而adeS無有義突變。
　　結(jié)論:
　　1.臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌，除對頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素和氨芐西林/舒巴坦的敏感率相對較高外，對其他抗菌藥物的耐藥率均較高，有的甚至可達100％。
　　2.多重耐藥鮑曼不動桿菌對β-內(nèi)酰類胺抗菌藥物和氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥性與β-內(nèi)酰胺酶和氨基糖苷類修飾酶的表達有關(guān)。
　　3.多重耐藥鮑