2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩67頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:通過觀察體外新生大鼠缺氧缺血性損傷模型,了解海馬神經(jīng)元的損傷情況,以及損傷后不同時間點及各組間細胞自噬變化和Ca-A/K通道亞基情況,探討自噬抑制劑3-methyladenine(3-MA)對自噬調(diào)節(jié)及對細胞存活的影響,并初步研究缺氧缺糖后Ca-A/K通道亞基變化與自噬的關(guān)系。
  方法:采用新生24小時以內(nèi)的SD(Sprague Dawley)大鼠進行海馬細胞原代培養(yǎng),行氧糖剝奪(oxygen glucose depriv

2、ation,OGD)的處理方法,模擬神經(jīng)元缺氧缺血模型。選取氧糖剝奪后0h、6h、12h、24 h、48 h、72 h、96 h七個時間點,通過Western blot及RT-qPCR法測定氧糖剝奪前后海馬神經(jīng)元自噬相關(guān)蛋白(LC-3、Beclin-1)、mRNA的變化和Ca-A/K通道亞基(GluR1、GluR2、GluR3)的蛋白變化;透射電鏡下檢測自噬的特異性結(jié)構(gòu);用CCK8法檢測細胞活性,采用Fluo-3AM流式檢測缺氧缺血后[

3、Ca2+]i的水平變化,應(yīng)用自噬抑制劑3-MA干預(yù)后,行上述檢測,初步探討自噬和Ca-A/K通道的關(guān)系及可能機制。
  結(jié)果:
  1、電鏡結(jié)果顯示,相比正常條件下的神經(jīng)元,缺氧缺糖后神經(jīng)元細胞漿內(nèi)有大量自噬體形成;預(yù)先采用3-MA干預(yù)的細胞組也有自噬體形成,但比缺氧缺糖組明顯降低。
  2、RT-qPCR結(jié)果顯示,與對照組相比,缺氧缺糖組0.5h和1h組LC3、Beclin-1均表達上升,缺氧缺糖0.5h組在0h表達

4、就開始上升,48h達到高峰后開始下降。缺氧缺糖1h組則72h達到高峰后下降,且比缺氧缺糖0.5h組表達量增高;3-MA干預(yù)1h組則在模型后6h就呈現(xiàn)下降,12h趨向正常水平。
  3、Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,缺氧缺糖0.5h組和1h組LC3、Beclin-1均表達升高,缺氧缺糖0.5h組在6h達到高峰,48h后開始下降。缺氧缺糖1h組則12h達到高峰后呈現(xiàn)下降趨勢;且比缺氧缺糖0.5h組表達增強,3MA干預(yù)

5、1h組在6h后呈現(xiàn)下降趨勢;缺氧缺糖1h組的GluR1、GluR3在缺氧缺糖后6h表達上升,持續(xù)到24h后下降,而GluR2則在6h表達下降,持續(xù)到24恢復(fù)正常水平。
  4、CCK8結(jié)果顯示,缺氧缺糖損傷恢復(fù)正常條件24h后細胞存活率為71±1%,48h存活率為80±4%,相應(yīng)的在每個時間點給予3-MA預(yù)處理后細胞存活率分別為75±5%、82±4%,無顯著性差(p>0.05)。
  結(jié)論:
  1.成功培養(yǎng)了原代海馬

6、細胞并建立了體外缺氧缺血模型。
  2.缺氧缺糖后自噬標記蛋白LC-3、Beclin-1及Ca-A/K通道亞基GluR1、GluR2、GluR3的表達發(fā)生變化。
  3.在一定程度損傷內(nèi),細胞自噬會隨缺氧缺糖時間延長而增加。
  4.3-MA可影響上述自噬相關(guān)蛋白在缺氧缺糖中的表達,抑制自噬減輕細胞損傷。
  5.缺氧缺糖損傷后,Ca-A/K通道發(fā)生結(jié)構(gòu)改變,提示形成以GluR2亞基減少為主的新通道,介導(dǎo)Ca2+

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論